Há muitos testes diferentes disponíveis, mas todos têm pouca especificidade. Na atresia biliar, a bilirrubina sérica total é aumentada e a proporção de bilirrubina de um minuto é aumentada de forma correspondente. Valores anormalmente elevados de fosfatase alcalina são úteis para fins de diagnóstico. Υ-glutamiltransferase Valores de pico acima de 300 IU/L são persistentemente elevados ou aumentam rapidamente. 5′ Os níveis de nucleotídase aumentam com hiperplasia significativa do canal biliar e são medidos a >25 IU/L. O teste de hemólise de peróxido de hidrogénio eritrócito é um método complexo e é positivo se a hemólise for superior a 80%. Valores máximos de alfa-fetoproteína inferiores a 40 μg/ml e outros testes de rotina à função hepática não têm qualquer significado discriminatório. A patogénese da icterícia, alterações de cor nas fezes e patologia abdominal deve ser rastreada para uma análise abrangente. Os testes seguintes são actualmente considerados como tendo algum valor diagnóstico. (i) Observação dinâmica da bilirrubina sérica: medição semanal da bilirrubina sérica, se a curva da quantidade de bilirrubina tende a diminuir com o curso da doença, pode ser hepatite; se continuar a aumentar, sugere atresia biliar. No entanto, a hepatite pesada com obstrução biliar extra-hepática pode também apresentar um aumento contínuo, o que torna difícil a diferenciação. (b) Ultra-sonografia: se não for vista vesícula biliar ou se for vista uma pequena vesícula biliar (menos de 1,5 cm), suspeita-se de atresia biliar. Se se verificar a presença de uma vesícula biliar normal, isto apoia a hepatite. Se o padrão de distribuição das condutas biliares intra-hepáticas puder ser visto, isto será mais útil no diagnóstico. (iii) teste de excreção de 99mTc-diethyl iminodiacetic acid (DIDA): Este teste substituiu o teste de excreção da rosácea marcada com iodo 131 nos últimos anos e tem uma elevada taxa de extracção de hepatócitos (48%-56%), que é superior a outros itens. Pode diagnosticar obstrução parcial do tracto biliar devido a anomalias estruturais. Se um cisto biliar comum ou uma restrição extra-hepática do canal biliar ocorrer com obstrução completa, o exame não mostra visualização intestinal e pode ser usado como um diferenciador para depressão biliar intra-hepática grave. Nas fases iniciais da atresia biliar, os hepatócitos estão a funcionar bem e o fígado é visível aos 5 minutos, mas nenhuma visualização do canal biliar é vista mais tarde, ou mesmo 24 horas mais tarde, nenhuma visualização intestinal é vista. Na hepatite neonatal, o ducto biliar extra-hepático está aberto e o intestino é visualizado, embora os hepatócitos não estejam a funcionar bem. (iv) Quantificação de lipoproteína-X (Lp-x): Lipoproteína-X é uma lipoproteína de baixa densidade que é elevada na presença de obstrução biliar. Tem sido estudado que todos os casos de atresia biliar são elevados e positivos numa idade muito jovem, enquanto que os casos de hepatite neonatal são negativos desde cedo, mas podem tornar-se positivos com a idade. A atresia biliar pode ser excluída se a Lp-X for negativa a mais de 4 semanas de idade; se for >500mg/dl, a atresia biliar é mais provável. Se o nível diminuir, o diagnóstico de síndrome de hepatite neonatal é apoiado; se continuar a aumentar, é provável que a atresia biliar aumente. (e) Determinação quantitativa dos ácidos biliares: recentemente aplicado ao método quantitativo dos ácidos biliares totais do soro de papel de sangue, os ácidos biliares totais do soro na atresia biliar é 107-294μmol/L, geralmente considerado para chegar a 100μmol/L são biliares deprimidos, a mesma idade sem grupo de controlo de icterícia é apenas 5-33μmol/L, a média é de 294μmol/L, pelo que tem valor diagnóstico. Os ácidos biliares totais urinários são também uma ferramenta de rastreio precoce. A média dos ácidos biliares totais urinários na atresia biliar foi de 19,93±7,53μmol/L em comparação com 1,60±0,53μmol/L no grupo de controlo, que foi 10 vezes maior do que as crianças normais. (vi) Colangiografia: A CPRE tem sido usada para diagnóstico diferencial precoce. As seguintes condições de atresia biliar são encontradas na imagem: (i) apenas os ductos pancreáticos são visualizados; (ii) por vezes podem ser encontradas anormalidades de fusão pancreática-mobiliar, e tanto os ductos pancreáticos como biliares podem ser visualizados, mas os ductos biliares intra-hepáticos não são visualizados, sugerindo atresia do tipo intra-hepático. A síndrome da hepatite neonatal tem os seguintes sinais: (i) os ductos pancreático-mobiliares são normais; (ii) os ductos biliares comuns são visualizados, mas são finos. (vii) Histologia da patologia da punção hepática: biopsia da punção hepática, ou biopsia e biopsia hepática percutânea são geralmente recomendadas. A hepatite neonatal é caracterizada por estruturas lobulares mal alinhadas, necrose hepatocelular, degeneração celular gigante e inflamação portal. As principais manifestações da atresia biliar são uma marcada hiperplasia do canal biliar e embolia biliar, e fibrose periportal, embora em alguns espécimes possam também ser observadas células gigantes multinucleadas. Por esta razão, as biópsias hepáticas podem por vezes ser difíceis ou mesmo erradas, e em 10-15% dos casos o diagnóstico correcto não pode ser feito nesta base. Em conclusão, uma vez que a atresia biliar é altamente suspeita no primeiro mês de vida, devem ser realizados vários métodos de diagnóstico diferencial, tais como investigações clínicas, laboratoriais, ultra-sonografias, radiológicas e histológicas, e a exploração cirúrgica também deve ser considerada. Nos casos em que a doença se aproxima dos 2 meses e o diagnóstico é ainda desconhecido, deve ser feita uma incisão abdominal superior direita para obter uma amostra de tecido hepático e um colangiograma com manipulação mínima. Se a vesícula biliar for encontrada, uma bílis normal é obtida por punção, sugerindo que o sistema biliar proximal não está ocluído, e a imagem intra-operatória é realizada para determinar o sistema biliar distal. Se as condutas biliares extra-hepáticas não estiverem ocluídas, é realizada uma biopsia excisional ou uma biopsia perfurante a partir de ambos os lóbulos do fígado para facilitar o diagnóstico. No caso de uma pequena vesícula biliar atrofiada com bílis branca, deve ainda ser tentado um colangiograma, pois uma vesícula biliar deflacionada pode ser vista em recém-nascidos com depressão biliar intra-hepática grave ou deficiência intra-hepática da via biliar. Se o angiograma mostrar condutas biliares extra-hepáticas pequenas e displásicas, mas que estão patentes, o procedimento é concluído com uma biópsia. Se a vesícula biliar estiver atretica ou ausente, o tecido da região hilar é dissecado e é realizada uma anastomose hilar-entérica. No caso típico da atresia biliar, o bebé nasce a termo e é muitas vezes considerado normal pelos pais e médicos na 1 a 2 semanas após o nascimento, a maioria deles não tem anomalias e as fezes são de cor normal. A icterícia torna-se geralmente aparente gradualmente na 2 a 3 semanas após o nascimento, em alguns casos aparece nos primeiros dias após o nascimento e é depois mal diagnosticada como icterícia fisiológica. As fezes tornam-se amarelo acastanhado, amarelo pálido, bege e mais tarde tornam-se um branco cinzento-acinzentado sem argila. No entanto, nas fases mais avançadas da doença, pode ocasionalmente aparecer uma ligeira cor amarelada, devido ao aumento das concentrações de pigmentos biliares no sangue e noutros órgãos e a uma pequena quantidade de pigmentos biliares que entram na luz intestinal através da mucosa intestinal e são misturados nas fezes. A urina é mais escura e mancha o amarelo das fraldas. A icterícia geralmente não diminui e aprofunda, a pele torna-se amarela dourada ou mesmo castanha e pode ser arranhada pela comichão, por vezes com fibróides lipomatosos, mas isto é pouco comum. Os casos individuais podem desenvolver dedos de pilão ou ser acompanhados por cianose. O fígado é aumentado e de textura dura. O baço é raramente sentido nas fases iniciais, e se um baço aumentado for sentido nas primeiras semanas, pode ser uma causa intra-hepática, com a hipertensão portal a desenvolver-se à medida que a doença progride. Nas fases iniciais da doença, o bebé ainda está em boas condições gerais, mas tem graus variáveis de malnutrição e está abaixo do peso para o comprimento e peso. Muitas vezes a mãe relata que a criança parece excitada e inquieta, uma condição que pode estar associada ao aumento dos ácidos biliares séricos. Nas fases posteriores da doença podem ocorrer várias carências de vitaminas lipossolúveis, e a deficiência de vitamina D pode estar associada a raquitismo e epífises amplas. Devido ao estado hemodinâmico alterado, curto-circuito arteriovenoso parcial e resistência vascular periférica reduzida, um sopro cardíaco de alto volume pode ser ouvido na região precordial e nos campos pulmonares.