A membrana amniótica tem sido utilizada como um biomaterial em aplicações básicas e clínicas durante muitos anos. No início do século XX, os enxertos de membrana amniótica foram utilizados para queimaduras e feridas ulceradas, seguidos de cirurgia cranio-cerebral, cirurgia abdominal, obstetrícia e ginecologia e oftalmologia. Com o desenvolvimento de tecnologias de bioengenharia e engenharia de tecidos, a utilização de membranas amnióticas tornou-se mais generalizada e a investigação mais avançada. 1, estrutura e função da membrana amniótica A estrutura normal do tecido da membrana amniótica humana está dividida em camada de células epiteliais, membrana de porão, camada densa, camada fibroblástica e camada esponjosa. Normalmente, a membrana amniótica preparada contém apenas a camada epitelial, membrana de porão e camada densa, enquanto a camada de células fibrosas e camada esponjosa são removidas durante a preparação. A camada epitelial contém células epiteliais amnióticas e uma variedade de factores de crescimento segregados pelas células epiteliais amnióticas. 2. características das membranas amnióticas preparadas por diferentes métodos Existem três tipos de membranas amnióticas utilizadas na investigação básica e clínica: membrana amniótica fresca, membrana amniótica congelada e matriz extracelular amniótica, cada uma com as suas próprias características[6]. 2.1 Membrana amniótica fresca Este tipo de membrana amniótica é feita lavando a membrana amniótica fresca em condições assépticas para remover o sangue, descascando a membrana amniótica e armazenando-a num frigorífico a 4°C para utilização no prazo de 24 horas. A membrana amniótica fresca retém as células epiteliais e as citocinas da membrana amniótica e é benéfica para a reconstrução da superfície ocular quando utilizada no tratamento de doenças da superfície ocular. No entanto, é ligeiramente antigénico devido ao seu conteúdo celular e tem um curto prazo de validade, o que torna inconveniente a sua utilização. 2.2 Criopreservação da membrana amniótica Freshly prepared amniotic membrane foi desidratada em 100% glicerol a 4°C e trocada uma vez a cada 24 horas por um total de 3 vezes. Armazenar num frigorífico de temperatura constante a 4°C. As membranas amnióticas desidratadas foram removidas e embebidas em solução 100% glicerol:DMEM (1:1) contendo sulfato de condroitina e armazenadas a -80°C num frigorífico de temperatura ultra baixa durante 6 meses. Pode ser armazenada por um período de tempo mais longo e é mais conveniente de utilizar do que uma membrana amniótica fresca. 2.3 A matriz extracelular foi removida da membrana amniótica após desidratação com glicerol, hidratada em PBS, adicionada a 0125% de tripsina, digerida a 37°C à temperatura ambiente, depois as restantes células epiteliais amnióticas foram removidas por raspagem com um raspador de células, sob um microscópio de contraste de fase invertida, depois de confirmar que não havia células, a membrana amniótica foi colocada sobre papel de película de acetato com o lado epitelial para cima, adicionada a 100% de glicerol:solução DMEM contendo sulfato de condroitina (1:1) Foram embebidos em solução 100% glicerol:DMEM contendo sulfato de condroitina (1:1) e armazenados num frigorífico a 4°C durante 1 semana ou a -80°C durante 6 meses a temperatura ultra baixa. Alguns investigadores têm membranas amnióticas reticuladas, com 012% de glutaraldeído, 015% de sulfato de sódio, 0125% de tripsina, enxaguadas repetidamente, liofilizadas, seladas em embalagens separadas e esterilizadas com óxido de etileno [7]. Este material remove os componentes celulares e solúveis das proteínas e retém apenas os componentes insolúveis do tecido original, incluindo principalmente colagénio, elastina, aminoglucano e proteínas estruturais, etc. Pode ser utilizado como um andaime para o crescimento celular e promover a adesão celular, e ao mesmo tempo tem um longo tempo de armazenamento e é fácil de usar.