Qin Liang He Zhaohong Ren Junkai Yang Tiejun Feng Chaojie Li Jing Zhao Pengcheng Ma Jing Li Jinglei
O cancro da próstata é um tumor comum entre os homens, com a maior incidência na Europa e nos Estados Unidos, onde ultrapassou o cancro do pulmão e é apenas o segundo maior em termos de taxa de mortalidade. Nos últimos anos, a incidência do cancro da próstata na China tem vindo a aumentar e tornou-se uma grande ameaça para a saúde dos homens. A detecção de PSA é um marco importante no diagnóstico precoce do cancro da próstata. No entanto, o PSA é específico apenas para tecido da próstata, mas não para tumores da próstata. Um grande número de estudos demonstrou que a coloração imuno-histoquímica para o antigénio precoce do cancro da próstata (EPCA), especialmente ELISA para a EPCA sérica, demonstrou boa especificidade e sensibilidade, e se a EPCA puder ser utilizada em combinação com o rastreio de PSA, irá certamente reduzir o número de biópsias de punção da próstata desnecessárias e reduzir a taxa de diagnósticos perdidos. É possível que a EPCA se torne um novo marcador específico para o rastreio e diagnóstico do cancro da próstata. He Zhaohong, Departamento de Urologia, Hospital Henan do Cancro
1. materiais e métodos
1.1 Recolha de espécimes de tecido
Quarenta e um espécimes de cancro da próstata (Pca), com idades compreendidas entre 54-86 anos (66,4±8,5 anos), 9 de espécimes de eléctrodos de próstata ressecados transuretral e 32 de biopsia sistemática de punção transrectal guiada por ultra-sons da próstata foram patologicamente confirmados como cancro da próstata (todos os adenocarcinomas), todos sem descompressão hormonal e cirúrgica e radioterapia. Foram obtidas amostras de hiperplasia benigna da próstata (BPH) de 34 amostras com idades compreendidas entre 55-71 anos (62,7±5,6 anos) por ressecção transuretral da próstata e ressecção suprapúbica da próstata; 5 controlos normais foram obtidos de amostras de próstata removidas por cistectomia total radical. Os espécimes de tecido benigno da próstata (BPH) e de tecido normal da próstata (NP) foram patologicamente confirmados. Os espécimes foram armazenados num frigorífico a -80°C dentro de 15 min após ressecção cirúrgica e biópsia de punção rectal.
1.2 Recolha de espécimes de sangue
A fim de minimizar os factores que podem afectar os níveis séricos de EPCA e PSA, foram colhidas amostras de acordo com os seguintes critérios de inclusão: (i) nenhuma massagem da próstata, ultra-som transretal da próstata, biopsia de punção da próstata e cistoscopia antes da admissão; (ii) nenhuma prostatite aguda ou crónica antes da admissão; (iii) foram também excluídos os doentes admitidos para retenção urinária aguda.
1.3 Métodos experimentais
1.3.1 Extracção de mRNA do tecido
As amostras de tecido foram armazenadas num frigorífico a -80°C dentro de 15 minutos após a ressecção cirúrgica e a biopsia sistemática de punção transretal guiada por ultra-sons da próstata, e a extracção total de ARN foi realizada após confirmação por exame patológico.
1.3.2 Análise da transcrição inversa da reacção de polimerase em cadeia (RT-PCR)
A primeira vertente foi sintetizada utilizando a transcriptase reversa MMLV. Isto foi realizado de acordo com as instruções fornecidas pela Beijing All-Style Gold Biotechnology Co.
1.3.3 Electroforese de gel de agarose
5ul de produto de amplificação foi misturado com tampão e adicionado aos poços perfurados do gel de agarose para electroforese. As condições de electroforese foram 2% gel de agarose, voltagem 4-10v/cm. A coloração EB foi realizada e as bandas de electroforese foram observadas sob projector UV e as bandas foram analisadas pelo sistema de registo e análise de imagens D-140.
1.3.4 Detecção de níveis séricos de EPCA por ELISA
O kit de teste do antigénio do cancro da próstata precoce humano (Humano) (EPCA) utilizado nesta experiência é um ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA) de fase sólida em sanduíche. Foram adicionados padrões de concentração conhecida de EPCA e amostras de concentração desconhecida à placa de rotulagem de enzimas de microtitulação para o ensaio.
2. resultados
2.1 Resultados da reacção RT-PCR
Após observação dos produtos de reacção RT-PCR por sistema de imagem em gel, todos os cDNAs transcritos ao contrário foram amplificados por PCR com iniciadores GAPDH para obter um fragmento alvo de 138bp, e por PCR amplificada com iniciadores de genes EPCA, em que os tecidos de cancro da próstata obtiveram um fragmento de 411bp em 34 das 41 amostras (como mostrado nas figuras 3 e 4), indicando que o mRNA da EPCA foi expresso nos tecidos O mRNA EPCA foi expresso positivamente em tecidos de cancro da próstata em 82,9% das amostras. Os resultados sugerem que a EPCA mRNA é especificamente expressa em tecidos de cancro da próstata.
Figura 1 Electroforese de produtos PCR do cancro da próstata e hiperplasia da próstata
Figura 2 Electroforese de produtos PCR do cancro da próstata, hiperplasia da próstata e tecido normal da próstata
2.2 Valores séricos de EPCA do cancro da próstata, cancro da próstata incidental, BPH e controlos saudáveis
Os níveis séricos pré-operatórios de EPCA nos 31 PCa, 9 IPCa, 181 BPH e 26 grupos de controlo saudáveis, bem como as várias características clinicopatológicas associadas à EPCA sérica, os níveis de EPCA sérica pré-operatória nos subgrupos relevantes, e os valores de P para comparação entre os grupos relevantes são mostrados na tabela abaixo.
Tabela 1 Valores EPCA de soro para PCa, IPCa, BPH e controlos saudáveis; valores P para comparações entre os grupos relevantes
Características
Número de casos
Média ± desvio padrão
Median
Gama
P-valor
EPCA (ng/ml)
População do estudo clínico
247
7.07±6.98
4.76
0,28 a 32,46
PCa
31
19.35±7.86
21.11
7.89～32.46