Uma TRUST negativa significa um teste serológico negativo de toluidina vermelha não-aquecida. Este é um teste associado a uma pessoa infectada com a espiroqueta de sífilis e se for negativo, significa que é muito provável que uma pessoa não esteja num estado que se siga a uma infecção por espiroqueta de sífilis, ou seja, é muito provável que não seja um doente com sífilis. Contudo, como o antigénio utilizado não é o da espiroqueta da sífilis, mas sim o de uma espiroqueta não sífilis, um teste negativo não exclui absolutamente a infecção da sífilis. É necessário um teste que utilize o antigénio da espiroqueta da sífilis, utilizando principalmente o teste de aglutinação de partículas de anticorpos da sífilis espiroqueta, ou TPPA para abreviar. Se este teste for negativo, só então se pode dizer que uma pessoa não foi infectada com a espiroqueta da sífilis e que não é um doente com sífilis. Se o teste TPPA for positivo, a pessoa foi infectada com a espiroqueta e é um doente com sífilis. No entanto, um teste serológico negativo de toluidina vermelha não aquecida indica que a pessoa com sífilis foi provavelmente submetida a um tratamento mais eficaz e é agora considerada curada.