A FIV de segunda geração refere-se à técnica de microinjecção intracitoplasmática de um único espermatozoide em ovócitos para auxiliar a conceção. A segunda geração de FIV é adequada para homens com oligozoospermia grave, espermatozóides fracos e malformados, azoospermia obstrutiva irreversível, como a ausência congénita dos canais deferentes, o bloqueio dos canais deferentes devido a infeção, etc. Além disso, a segunda geração de FIV pode ser utilizada quando a primeira geração de FIV falhou repetidamente a fertilização dos espermatozóides e a taxa de fertilização é muito baixa, etc. A segunda geração de FIV é uma técnica de microfertilização desenvolvida com base na transferência de embriões por fertilização in vitro na primeira geração de FIV, em que os espermatozóides são injectados diretamente no citoplasma do ovócito para completar a fertilização, e o processo após a fertilização é, na realidade, o mesmo que o da primeira geração de FIV. Foi desenvolvida principalmente para resolver a infertilidade masculina.