1. antecedentes.
O cancro do rim é uma malignidade comum do tracto urinário. De acordo com a Sociedade Americana de Oncologia, há cerca de 40.000 novos casos de cancro renal nos Estados Unidos todos os anos, e a incidência de cancro renal a nível mundial aumenta 2% todos os anos, com quase 100.000 mortes por cancro renal todos os anos. Quase metade de todos os doentes com cancro renal já se encontram numa fase avançada quando diagnosticados pela primeira vez, e cerca de 40% dos doentes têm recorrência ou metástase após a cirurgia. A taxa de sobrevivência de três anos para aqueles que não recebem tratamento é inferior a 5%, e os inquéritos epidemiológicos relacionados na China também mostram que o número de novos casos de cancro do rim na China está a aumentar ano após ano. Actualmente, o principal método de tratamento do cancro do rim é a ressecção cirúrgica. A radioterapia e a quimioterapia não são significativamente eficazes no tratamento do cancro do rim. Contudo, a taxa de remissão da IL-2 é baixa e a incidência de efeitos secundários tóxicos é elevada. Os efeitos secundários tóxicos causados pela IL-2, tais como a síndrome de fuga capilar e sintomas gastrointestinais, tornam muitos doentes com cancro renal que se espalharam incapazes de tolerar doses elevadas do medicamento.
Na década de 1980, a imunoterapia celular secundária abriu um novo campo de tratamento biológico do cancro renal. Após mais de 20 anos de investigação e prática, a imunoterapia celular biológica (DC-CIK) tornou-se uma nova abordagem para o tratamento eficaz do cancro renal metastásico. A imunoterapia adequada pode ajudar a remover as células cancerosas residuais do corpo dos pacientes e abordar metástases subclínicas difíceis de resolver com terapias convencionais, reforçando e consolidando assim ainda mais a eficácia do cancro renal, reduzindo a recorrência e melhorando a qualidade de vida dos pacientes com tumor.
1.1 Vacina antitumoral DC
A terapia com vacina tumoral é utilizada para estimular a resposta imunitária antitumoral específica de um paciente, introduzindo antigénios tumorais no corpo do paciente, o que tem as vantagens da especificidade e da longa manutenção do efeito imunitário in vivo.
Como o problema central da evasão tumoral pelo sistema imunitário é que os antigénios tumorais não são efectivamente entregues aos linfócitos T, o método mais eficaz de entrega de antigénios é que as células que apresentam antigénios têm tanto antigénios tumorais como um 1º e 2º sistema de sinalização totalmente funcional. As vacinas actuais contra tumores concentram-se, portanto, mais nas vacinas celulares, quer melhorando os sistemas de 1ª e 2ª sinalização das células tumorais para as tornar totalmente funcionais, chamadas vacinas de células tumorais modificadas, quer utilizando APCs profissionais para a captação, processamento e fornecimento de antigénios tumorais, utilizando principalmente vacinas DC com antigénios tumorais carregados.
As células dendríticas (DC) são actualmente consideradas como as células mais importantes na imunidade aos tumores. Elas induzem, activam e proliferam linfócitos T citotóxicos (CTL) através da captação de antigénios tumorais e apresentam-nos aos linfócitos T, mediando uma poderosa e específica imunidade antitumoral das células. As CC obtidas in vitro têm a mesma função de apresentação de antigénio que as CC maduras purificadas in vivo, que é a base para a sua utilização no tratamento clínico de doenças malignas.
1.1.1. características principais dos CD maduros
(i) A superfície da célula tem muitas saliências irregulares dendríticas;
(2) A superfície celular é rica em moléculas que contribuem para a apresentação de antigénios, tais como moléculas MHC classe I e II, moléculas co-estimuladoras B721 e B722, moléculas de adesão celular ICAM21 e ICAM23, e antigénios L FA21 e L FA23 relacionados com a função linfocitária, etc;
(iii) Na resposta linfocitária mista, activa tanto células T auto-reactivas do mesmo MHC como células T alogénicas de diferentes MHC, e a sua característica mais importante é que pode estimular significativamente a proliferação de células T iniciais (chamadas T ingénuas) e estabelecer uma resposta imunitária primária;
④ A capacidade de migrar para áreas linfocitárias locais de células T;
⑤ Os DC são 100-1.000 vezes mais capazes de estimular a proliferação de células T e a criação de antigénios do que os macrófagos e as células B.
(6) Para além de induzir linfócitos T citotóxicos específicos de antigénio, os DC também podem afectar a proliferação de células B e activar respostas imunitárias humorais, directa ou indirectamente.
1.1.2 Vacinas de células tumorais DC
Actualmente, um grande número de células dendríticas pode ser obtido através da cultura de células mononucleares do sangue periférico ou da medula óssea dos doentes com citocinas, tais como GM-CSF, IL-4, TNF-α e Fit3-L. Os antigénios tumoral podem ser carregados em DC sob a forma de genes, péptidos, proteínas ou mesmo células intactas, tornando assim a preparação de vacinas de células DC significativamente mais fácil do que as vacinas de células tumorais geneticamente modificadas, facilitando assim a entrada de vacinas DC em ensaios clínicos.
Os genes do antigénio tumoral da maioria dos tumores sólidos ainda não são bem compreendidos e o número de antigénios tumoral claramente identificados é ainda muito pequeno. Há também falta de provas in vivo sobre se os conhecidos antigénios associados a tumores representam realmente antigénios de rejeição de tumores. Portanto, a fusão de células tumorais com DC fornece todos os antigénios celulares, e as células fundidas possuem antigenicidade de células tumorais e apresentação de antigénios DC e funções de activação de células T, de modo a que as funções de captação, processamento e apresentação de antigénios de DC possam ser plenamente utilizadas.
1.2. células CIK
As células assassinas induzidas por citocinas (CIK) são uma nova classe de células assassinas de tumores preparada pela Faculdade de Medicina da Universidade de Stanford em 1991 com base em células assassinas activadas por CD3 (células CD3AK), que são obtidas através da co-cultura de células mononucleares do sangue periférico humano com várias citocinas (por exemplo, anti-CD3McAb, IL-2, IFN-γ, IL-1α, etc.) in vitro durante um período de tempo. Uma população heterogénea de células obtidas após a co-cultura durante um período de tempo. As células CIK são também conhecidas como linfócitos T do tipo NK porque expressam tanto as moléculas de proteína de membrana CD3 como CD56, e têm as vantagens tanto da poderosa actividade anti-tumoral dos linfócitos T como da actividade não restrita de eliminação de tumores das células NK.
1.2.1. características das células CIK
Taxa de proliferação rápida: O problema do baixo número de células obtidas pela expansão in vitro de células effector foi resolvido.
Elevada actividade de matança de tumores: devido à sua elevada taxa de sobrevivência e forte capacidade proliferativa.
Amplo espectro de eliminação de tumores: É eficaz contra células tumorais de diferentes origens tecidulares.
É também sensível às células tumorais multi-resistentes.
Toxicidade mínima para as células precursoras hematopoiéticas normais da medula óssea.
Resistente à apoptose de células tumorais Fas-FasL.
1.2.2. mecanismo de matança tumoral de células CIK
1.2.2.1 Reconhecimento: Uma vez que o efeito citocida do CIK não é restrito ao HCM, os CD4 e CD8 não são essenciais no seu reconhecimento das células tumorais.
1.2.2.2 Mecanismo de matança: células CIK matam e células tumorais lise através de três vias
Morte directa de células tumorais por células CIK: Quando estimuladas por células alvo exógenas anti-CD3McAb ou sensíveis, as células CIK libertam grânulos citotóxicos citoplásmicos no espaço extra-membrana, que têm um efeito de morte directa nas células alvo.
A actividade de eliminação de tumores de um grande número de citocinas inflamatórias produzidas por células CIK após activação: por exemplo IFN-γ, TNF-α, IL-2, etc., não só têm um efeito inibidor directo sobre as células tumorais, como também matam as células tumorais indirectamente, modulando a capacidade de resposta do sistema imunitário do organismo.
As células CIK induzem apoptose tumoral: as células CIK que expressam FasL em cultura aumentam a sua resistência à apoptose FasL desencadeada pelas células tumorais FasL+ por um lado, e podem também exercer o seu efeito mortal crónico sobre as células tumorais induzindo apoptose nas células tumorais Fas+, assegurando a durabilidade a longo prazo da actividade antitumoral.
1.3 Efeitos antitumorais sinergéticos das células DC e CIK
DC e CIK são dois componentes importantes da imunoterapia tumoral: o primeiro reconhece os antigénios e activa o sistema imunitário adquirido, enquanto o segundo mata as células tumorais ao exercer a sua própria citotoxicidade e ao secretar as citocinas, cuja combinação assegura um sistema imunitário eficiente e harmonioso.
As células CIK são células assassinas não específicas induzidas por uma variedade de citocinas e podem secretar uma variedade de citocinas (por exemplo IL-4, IFN-γ, etc.) e têm uma actividade assassina mais forte do que as células LAK e CD3AK. Em estudos clínicos, verificou-se que a eficácia de alguns pacientes tratados com células imuno-efeitoras em imunoterapia secundária não é satisfatória, o que se acredita ser devido à resistência das células tumorais a estas células imuno-efeitoras. A co-cultura de células CIK e DC aumentou significativamente a especificidade do fornecimento de antigénio por células dendríticas e moléculas co-estimuladoras, além de promover a secreção de IL-12 por células dendríticas e a citotoxicidade por células CIK, enquanto que o bloqueio da absorção de IL-12 reduziu a citotoxicidade das células CIK. A citotoxicidade das células CIK foi diminuída pelo bloqueio da absorção de IL-12. Portanto, a combinação de células CIK e DC no tratamento de tumores malignos ajudará a aliviar a incompetência imunitária das células T em alguns pacientes com tumores, exercendo assim um efeito sinérgico anti-tumoral.