A cultura de expetoração refere-se à seleção de expetoração para cultura de bactérias, fungos e outros agentes patogénicos. A primeira expetoração no início da manhã é geralmente mais informativa, mas não obrigatória, podendo também ser selecionada a expetoração profunda de outras alturas do dia. A cultura de expetoração destina-se principalmente a detetar a presença de agentes patogénicos como bactérias, fungos e tuberculose, bem como a realizar testes de sensibilidade aos medicamentos, sendo utilizada principalmente para considerar os doentes com infecções do trato respiratório, especialmente as infecções pulmonares, e pode orientar a escolha de antibióticos para tratamento. A primeira expetoração no início da manhã, após gargarejo com solução salina ligeira, é geralmente necessária, mas a expetoração de outras alturas do dia também pode ser escolhida, mas é necessária uma expetoração profunda para excluir a possibilidade de as amostras de expetoração serem contaminadas por bactérias instaladas na orofaringe. Para além disso, os doentes submetidos ao diagnóstico precisam de ser assistidos com outros testes a realizar. Os resultados da cultura de expetoração podem estar diretamente relacionados com o método de tratamento, pelo que o doente deve seguir as instruções do médico e a expetoração deve também ser enviada para exame o mais rapidamente possível depois de ser retida para evitar a contaminação ou a morte de certas bactérias.