Na prática clínica, a FVS, que contém ADSC, é normalmente obtida por lipoaspiração do abdómen ou das coxas, sendo depois centrifugada, digerida e lavada, etc. Em seguida, é misturada com tecido adiposo numa determinada proporção e transplantada para a área recetora. A FVS também pode ser cultivada in vitro para obter ADSC de parede, e as ADSC com bom estado de crescimento in vitro podem ser utilizadas para transplante composto com tecido adiposo. Uma vez que a tecnologia CAL é normalizada e fácil de automatizar, está atualmente disponível equipamento industrializado, o que torna mais conveniente a promoção e a aplicação desta tecnologia. I. Aplicação da tecnologia SVF CAL (a) aspiração da gordura Os estudos revelaram que a gordura subcutânea do abdómen e da coxa humana é a mais rica em ADSC. Por conseguinte, a técnica CAL selecciona frequentemente as duas áreas acima referidas como a melhor escolha para a área doadora de gordura. Numa sala de operações esterilizada, o local de sucção da gordura é anestesiado com uma solução de inchaço para inchar os tecidos e, em seguida, a gordura é aspirada através de um tubo de sucção de 2,5-3 mm de diâmetro da forma habitual. A mistura aspirada pelo tubo de lipoaspiração de pressão negativa contém componentes da solução de intumescimento, tecido adiposo, tecido conjuntivo, células sanguíneas e outros fragmentos de tecido. (ii) Preparação da FVS A gordura aspirada foi dividida em duas partes, uma das quais foi utilizada para a extração da FVS e, subsequentemente, a FVS extraída foi misturada com a outra parte da gordura e a mistura foi utilizada para o enxerto. Por conseguinte, o processo de extração de FV contendo ADSC é um passo crítico na técnica de CAL. Todo o processo de separação geralmente leva 70-80 min, e o processo básico é o seguinte. 1.Centrifugação Metade da gordura obtida por aspiração é centrifugada, através da qual componentes como adipócitos, lípidos e células sanguíneas podem ser separados. Após a centrifugação, a mistura pode ser dividida nas camadas superior, média e inferior: a camada superior, principalmente para a gordura, que contém triacilglicerol e partículas celíacas, que é o produto das células adiposas após a trituração; a camada média, principalmente para a purificação da gordura; a camada inferior, contendo células sanguíneas, plasma, filtrado, etc. Neste momento, a camada média é a gordura purificada. Nesta altura, a camada intermédia é o tecido adiposo purificado. Uma parte do tecido adiposo é mantida para reserva e a outra parte é retirada para continuar as etapas a seguir para apresentar SVF. 2. Digestão A parte adiposa é digerida com uma quantidade igual de colagenase estéril a 0,075% por oscilação (37 ℃, 30min). Lavagem A porção de gordura e a porção líquida foram separadas por lavagem repetida com fosfato-bufersalina (PBS) ou solução salina e centrifugação. A fração gorda foi eliminada e a fração líquida foi retida. Lavar com PBS ou solução salina e centrifugar. A fração de células tangíveis subjacente obtida por centrifugação é a FVS, que é uma mistura de células ricas em ADSC e, para além das ADSC, existem também células de origem sanguínea, células endoteliais vasculares, etc. (iii) Formação do complexo tecido adiposo-FVS A outra metade da gordura obtida por aspiração foi misturada com a FVS obtida por tratamento e deixada em repouso durante 15 minutos, de modo a que as ADSC fossem totalmente adsorvidas na gordura. Estas gorduras assemelham-se a suportes biológicos activos e são reservadas como enxertos. As células isoladas têm de ser rigorosamente testadas quanto à quantidade e qualidade, e uma pequena porção de FVS pode também ser extraída para cultura celular, a fim de verificar a atividade das células. (D) Transplante do complexo tecido adiposo-SVF O transplante do complexo tecido adiposo-SVF foi efectuado de acordo com os métodos convencionais de enxerto de gordura. Em segundo lugar, a aplicação da tecnologia ADSC CAL (1) Os mesmos passos acima descritos para completar a aspiração de gordura e a preparação da FV. (2) Cultura de ADSC: inocular a mistura no recipiente de cultura e cultivá-la com solução de cultura celular, geralmente utilizando solução de cultura DMEM contendo 10% de soro fetal bovino. Mudar a solução uma vez a cada 2-3 d. Os componentes celulares mais sanguíneos contidos na FVS podem ser removidos mudando a solução porque não podem crescer contra a parede. As células aderentes à parede continuam a ser cultivadas. Depois de as células terem crescido até um determinado número, é feita uma suspensão e depois misturada com o tecido adiposo aspirado para aplicação. (3) Formação do complexo tecido adiposo-ADSC: ressuspender o tecido adiposo, misturar a suspensão de células com ele e deixar durante 15 minutos para que as ADSC sejam totalmente adsorvidas na gordura. (4) Transplante do complexo tecido adiposo-ADSC: o transplante do complexo tecido adiposo-SVF foi efectuado de acordo com o método de rotina do transplante de gordura.