Mycoplasma pulmonale é geralmente diagnosticado se a potência de anticorpos únicos for superior a 1:160. Um quadruplo aumento da potência de anticorpos durante o período de recuperação em comparação com o período inicial pode também levar a um diagnóstico de infecção por micoplasma. Como o sistema imunitário não está totalmente desenvolvido em crianças, o período entre a infecção por micoplasma e a produção de anticorpos pode não produzir uma resposta imunitária, ou seja, não se produz IgM, pelo que os testes de IgM podem ser ligeiramente positivos ou decrescentes, ou mesmo indetectáveis. Os testes de micoplasma pulmonar, mais comummente utilizados em hospitais, são aglutinação de partículas de gelatina, também luminescência e imunoensaios ligados a enzimas, e os actuais métodos padrão de ouro são métodos de cultura e de ácido nucleico.