O tecido muscular, fibroblastos de pele e linfócitos do sangue periférico também podem ser utilizados para detectar com precisão a actividade GAA, mas todos têm limitações. O ensaio de actividade leva pelo menos várias semanas; a fraca pureza do isolamento linfocitário conduzirá a falsos negativos no ensaio. O uso de DBS e ensaio de leucócitos sob inibidor de acarbose é não invasivo, preciso e rápido, e é importante para o diagnóstico precoce de pacientes com GSD tipo II. O método DBS estabelecido neste estudo para a determinação da actividade GAA mostrou uma boa precisão com variação intra-lote dentro de 8% e variação entre lotes dentro de 10%. O método DBS é conveniente para a recolha, armazenamento e transporte de sangue, e oferece grande conveniência e viabilidade para a determinação de GAA em pacientes de campo. A prevalência de GSD tipo II varia muito de acordo com a população e a distribuição geográfica [1,3]. Devido à apresentação clínica não específica da doença e ao conhecimento limitado dos clínicos na China, apenas 31 casos de GSD II foram notificados até agora na China continental [10-14], e os dados epidemiológicos sobre a incidência de GSD II na China continental têm ainda de ser clarificados após o rastreio dos recém-nascidos para a doença. Neste estudo, estabelecemos que a actividade média da GAA nos grupos neonatais normais e adultos infantis pelo método DBS foi 27,09 e 16,36 pmol/(punch?h), respectivamente, e foi significativamente mais elevada no grupo neonatal do que no grupo adulto infantil. os valores medianos nos grupos neonatais normais australianos e dinamarqueses por Meikle et al[14] utilizando o imunoensaio quantitativo foram 46,8 e 45,7 pmol /(punch?h), em comparação com uma mediana de 24,4 pmol/(punch?h) no grupo adulto australiano, e Zhang et al [7] reportaram uma média GAA de 20 pmol/(punch?h) no método DBS adulto normal, semelhante aos nossos resultados. Uma vez que as actividades enzimáticas GAA dos doentes com GSD tipo II envolvidos nos estudos acima mencionados eram todas significativamente inferiores ao limite de detecção, a diferença nos valores normais entre os grupos neonatais e os grupos de crianças adultas não afectou o diagnóstico e o rastreio dos doentes. Neste estudo, a actividade GAA foi medida em quatro pacientes com suspeita clínica de GSD tipo II para clarificar o diagnóstico. o método DBS descobriu que as actividades enzimáticas GAA dos pacientes estavam todas abaixo do limite de detecção, sugerindo que o método DBS podia distinguir com precisão entre pacientes e heterozigotos. em seis casos, as actividades enzimáticas heterozigotas atravessaram a zona de baixo valor dos controlos normais, pelo que o método DBS não podia distinguir entre heterozigotos e normais. O método dos leucócitos mediu a actividade GAA em três pacientes e constatou que os pacientes eram significativamente inferiores ao normal. Combinando os sintomas clínicos de fraqueza muscular progressiva com os achados de hipertrofia cardíaca e biopsia miocárdica patológica, a criança 2 foi diagnosticada com GSD tipo II infantil, e os pacientes 3 e 4 foram diagnosticados com GSD tipo II tardiamente. Em conclusão, o método DBS tem as vantagens da sensibilidade, rapidez, alto rendimento, fácil transporte e preservação da amostra, e é adequado para o rastreio e diagnóstico de GSD tipo II em recém-nascidos e grupos de alto risco; o método de leucócitos tem as vantagens da precisão, rapidez e especificidade, e é adequado para a confirmação do diagnóstico em pacientes suspeitos.