Resumo: Objectivo: Investigar o valor e significado da utilização de impressões digitais de proteínas séricas para rastrear marcadores séricos de cancro da mama para o diagnóstico clínico do cancro da mama. MÉTODOS: Os níveis relativos de proteínas séricas em 42 doentes com cancro da mama foram examinados utilizando o Modelo Americano de Sistema Microarray de Proteínas PBSII/C, incluindo impressões digitais de proteínas e microarrays de proteínas, enquanto 42 soros humanos normais foram utilizados como controlos. RESULTADOS: Foi identificado um total de três proteínas com picos de expressão estatisticamente diferentes em doentes com cancro da mama e em doentes humanos normais com rácios de massa/carga de 4800 Da, 6410 Da e 9300 Da, respectivamente, com 89,3% de sensibilidade e 92,7% de especificidade, mostrando que estes três marcadores séricos são eficazes no diagnóstico do cancro da mama. Conclusão: A técnica de recolha de impressões digitais de proteínas séricas tem dados fiáveis em marcadores de soro para rastreio do cancro da mama e pode ser aplicada no diagnóstico biológico do cancro da mama. A impressão digital de proteínas é uma técnica de análise de proteínas baseada na espectrometria de massa na qual as proteínas de interesse são clivadas em pequenos fragmentos de péptidos e analisadas com precisão por espectrómetros de massa, tais como a espectrometria de massa de tempo de voo assistida por laser (MALDL-TOF-MS) ou a espectrometria de massa de tempo de voo por electrospray (EST-TOF-MS). Muitos estudos têm demonstrado a eficácia da aplicação de técnicas de recolha de impressões digitais de proteínas ao diagnóstico clínico, especialmente para o rastreio de marcadores tumorais. O cancro da mama tornou-se uma importante causa de morte nas mulheres e o seu diagnóstico precoce é de grande importância para o controlo do cancro da mama [1]. O objectivo deste estudo é investigar o valor e a importância da utilização de impressões digitais de proteínas séricas para rastrear os marcadores séricos do cancro da mama para o diagnóstico clínico do cancro da mama, e os resultados do estudo são comunicados da seguinte forma: 1. Dados gerais 1.1 População do estudo Um total de 30 casos de doentes com cancro da mama (que tinham sido confirmada cirurgicamente e patologicamente), com idades compreendidas entre 34-76 anos, idade média de 51 anos; peso 46 kg O peso médio dos pacientes era de 46kg -77kg, 54,6kg; 7 eram do estádio I, 9 do estádio II, 7 do estádio IIIa, 3 do estádio IIIb e 2 do estádio IV. Trinta sujeitos normais foram também seleccionados como controlos. Não houve diferenças estatísticas entre os sujeitos normais e os pacientes em termos de idade e peso. 1.2 Materiais e equipamento experimental O cromatógrafo líquido de alto rendimento foi adquirido à Agilent, EUA, modelo Agilent 1200. Tris-HCL, acetato de sódio, ácido clorídrico, tampão 10×PBS, ureia, ácido trifluoroacético, hidróxido de sódio e outros reagentes foram adquiridos à Sigma. Um tudo em um peptídeo e um tudo em um microarray proteico, microarray proteico e tempo de ionização de superfície de espectrometria de massa de vôo (SELDI-TOF MS) foram adquiridos em Cipher-gen, EUA. 1.3 Métodos 1.3.1 Processamento do chip de proteína Inserir os chips no processador de biochip, adicionar 200 µl de tampão de ligação a cada poço, agitar a 500 r/min durante 5 min, e descartar o sobrenadante [2]. Repetir a operação acima referida uma vez. 1.3.21 Amostragem Adicionar 100 ul de preparação de amostras a cada poço do processador de chips e agitar a 500r/min durante 1 hora a 4°C. Depois de descartar a amostra, adicionar 200 ul de tampão a cada poço do chip e agitar à temperatura ambiente durante 5 min a 500 r/min num oscilador. Deitar fora o tampão, adicionar 200ul de água desionizada a cada poço e sacudir imediatamente, lavar 3 vezes no total. Desmontar rapidamente o processador do chip, remover o chip, deixar secar a superfície e depois adicionar 0,8 tampão SPA gota a gota por poço e secar à temperatura ambiente. 1.4 Processamento estatístico Os dados de proteínas de doentes com cancro da mama e picos de soro humano normal mostrando diferenças de desempenho foram analisados utilizando o software BiomakerWizard 3.1 e SPSS13 para rastrear picos de proteínas com diferenças estatisticamente significativas [4]. Combinando os pesos dos picos individuais e comparando os resultados da análise discriminante de diferentes permutações de picos de proteínas, foi seleccionada a melhor combinação para estabelecer um modelo de diagnóstico de impressões digitais de proteínas para o cancro da mama. 2. resultados Foi encontrado um total de três proteínas com picos de expressão estatisticamente diferentes em doentes com cancro da mama e doentes humanos normais, e os seus rácios de massa/carga foram de 4800Da, 6410Da e 9300Da, respectivamente, com 89,3% de sensibilidade e 92,7% de especificidade, mostrando que estes três marcadores séricos foram eficazes para o diagnóstico e diagnóstico do cancro da mama. 3. discussão Na China, o cancro da mama é o tumor maligno mais frequente nas mulheres e a segunda principal causa de morte nas mulheres, sendo responsável por 31% dos tumores femininos, de acordo com as estatísticas. A detecção precoce do cancro da mama contribuirá grandemente para o controlo do cancro, facilitando assim o diagnóstico e tratamento do cancro da mama quando este se encontra em estado infiltrativo antes de se metatar. Foi demonstrado que vários marcadores de proteínas séricas são de grande valor no diagnóstico de tumores mamários. A US Food and Drug Administration adoptou marcadores tumorais tais como CA15.3 e CA27.29, que são recomendados para serem utilizados apenas para monitorizar o tratamento ou a recorrência de cancro da mama avançado. A necessidade de biomarcadores que possam ser utilizados sozinhos ou em combinação com marcadores existentes no rastreio do cancro da mama continua a ser urgente. Ao contrário dos marcadores tumorais tradicionais que só podem ser analisados por um único indicador, a tecnologia de impressões digitais de proteínas analisa sistematicamente os produtos de expressão genética mais pequenos (proteínas ou péptidos) desde as fases iniciais da doença de um paciente através de uma análise dinâmica e panorâmica das proteínas para obter informações como o conteúdo de várias proteínas e o peso molecular das proteínas na amostra a ser examinada, e traça um perfil de impressões digitais de proteínas (EPG), que pode ser comparado com indivíduos normais, estados subnormais, doenças benignas e cancro através de software informático. O EPG pode ser utilizado para identificar e capturar novas proteínas relacionadas com a doença de forma rápida, sensível e específica, comparando e analisando as diferenças com as bibliotecas de impressões digitais de doentes normais, subnormais, benignos e com cancro. O objectivo deste estudo era investigar o valor e o significado da utilização de impressões digitais de proteínas séricas para o rastreio de marcadores séricos de cancro da mama para o diagnóstico clínico do cancro da mama. Os resultados do microarray de proteínas mostraram que foram encontradas três proteínas com picos de expressão estatisticamente diferentes em doentes com cancro da mama e indivíduos normais, com taxas de massa/carga de 4800 Da, 6410 Da e 9300 Da, respectivamente, e a sua sensibilidade foi de 89,3% e especificidade de 92,7%, indicando que a técnica de recolha de impressões digitais de proteínas séricas possui dados fiáveis para o rastreio de marcadores séricos do cancro da mama e pode ser aplicada ao cancro da mama Os resultados mostraram que a técnica de recolha de impressões digitais de proteínas séricas é fiável no rastreio de marcadores séricos para o cancro da mama e pode ser aplicada ao diagnóstico biológico do cancro da mama.