O cancro do fígado é um dos cancros mais comuns, e a incidência e taxa de mortalidade do cancro do fígado na China é a mais elevada do mundo, sendo responsável por 55% dos novos casos e mortes a nível mundial todos os anos, dos quais mais de 80% são do tipo carcinoma hepatocelular (HCC). p53 é conhecida como a “polícia molecular”, e as suas principais funções biológicas são manter a estabilidade do genoma celular, regulando negativamente o crescimento celular e induzindo a apoptose. Estudos descobriram que pelo menos 50% dos tumores malignos humanos têm alterações do gene p53. Com o conhecimento profundo da patogénese do carcinoma hepatocelular, há cada vez mais provas de que a p53 está intimamente relacionada com o processo de hepatocarcinogénese. Neste artigo, revemos a expressão e métodos de detecção da p53 no carcinoma hepatocelular, bem como a relação entre a p53 e as características clínicas do carcinoma hepatocelular e o progresso da terapia genética. Pan Xiaoping, Departamento de Cirurgia Vascular Intervencionista, Wuhai People’s Hospital 1 Expressão do p53 no carcinoma hepatocelular Em doenças normais da população e benignas, os anticorpos para p53 raramente são detectados, enquanto os anticorpos séricos p53 são detectados na maioria dos doentes com tumores malignos, e a taxa positiva é de cerca de 7%-63%. As mutações no gene p53 estão presentes em mais de 50% dos carcinomas hepatocelulares, e as mutações e supressões do gene p53 encontram-se em 36% dos carcinomas hepatocelulares progressivos, pelo que o gene é considerado como estando associado ao carcinoma hepatocelular. Gong Ling et al. examinaram a expressão da p53 em 40 tecidos hepatocelulares associados à hepatite B e os seus correspondentes tecidos paraneoplásicos. Os resultados mostraram que a expressão positiva da proteína P53 era significativamente mais elevada nos tecidos do carcinoma hepatocelular do que nos tecidos paraneoplásicos do fígado (P=0,047). Ren Yong et al. examinaram a expressão da proteína P53 em 49 tecidos HCC, 21 tecidos paraneoplásicos, e 10 tecidos hepáticos normais, e os resultados mostraram que 53,1% dos tecidos HCC tinham expressão positiva da proteína P53. A expressão positiva da proteína P53 nos tecidos paraneoplásicos foi de 9,5%. A diferença entre as duas foi significativa (P<0,01). 10 casos de tecidos hepáticos normais não mostraram expressão da proteína P53. Yu Hong et al. recolheram 62 casos de tecidos primários de cancro do fígado e tecidos paraneoplásicos correspondentes, detectaram a expressão da proteína P53 e observaram. Os resultados mostraram que a expressão de p53 nos tecidos cancerosos era significativamente mais elevada do que a dos tecidos paraneoplásicos e positivamente correlacionada com o grau de diferenciação tumoral (P<0,05); não houve diferença entre a expressão de p53 e o sexo, idade e tamanho do tumor. Zhang Zhipei et al. recolheram 42 casos de tecidos de parafina HCC e detectaram a expressão de p53 mutante nos tecidos HCC, e a análise mostrou que a expressão positiva de p53 mutante estava principalmente localizada no núcleo, e a taxa positiva de p53 mutante nos tecidos HCC era de 47. 62%. A taxa positiva de anticorpos p53 nos tecidos HCC variou muito entre os estudos, e Guan Yongsong et al. sugeriram que poderia estar relacionada com a raça e estádio tumoral dos pacientes incluídos no estudo, bem como com o local e tipo de mutação p53. Contudo, a sobreexpressão da proteína p53 nos tecidos de HCC é certa, e a p53 pode ser usada como um indicador importante para responder ao comportamento biológico do HCC. 2 Métodos de detecção da p53 no carcinoma hepatocelular Geralmente, a sequenciação do gene p53 em tecidos tumorais ou mostrando a proteína p53 mutante em células tumorais por imunohistoquímica é o padrão de ouro para detectar a presença da mutação do gene p53 em tumores. O produto oncogénico do tipo selvagem p53, proteína P53, tem uma meia-vida curta (1-2h) e permanece em níveis baixos em células normais, tornando assim difícil a sua detecção; enquanto o produto proteico P53 expresso pelo gene p53 mutado pode ser detectado por imunohistoquímica devido à sua longa meia-vida (2-12h), que é a mais utilizada na prática clínica para detectar mutações do gene p53 ao nível da proteína. Chen Ke-he et al. utilizaram a tecnologia de microarranjo oligonucleotídeo para detectar a frequência e a forma das mutações em sete locais de mutação comuns do gene p53 no carcinoma hepatocelular na China, e os resultados foram verificados pela sequenciação do ADN. Um total de 54 amostras de carcinoma hepatocelular incluídas em parafina foram detectadas, e a taxa de mutação do gene p53 foi de 38,9% (21/54). As mutações do gene p53 ocorreram principalmente na região de codificação 249; os resultados foram validados por sequenciação de ADN, e a taxa de sobreposição entre as duas técnicas foi de 100%. A FASAY tem maior sensibilidade para a detecção de mutações p53 em comparação com os ensaios imuno-histoquímicos. A técnica FASAY é uma técnica de análise funcional alélica para a detecção de mutações p53 a nível do RNA. Wu Xiaomou et al. utilizaram esta técnica em combinação com sequenciamento de ADN para detectar mutações estruturais no gene p53 e a função da proteína P53 em 28 amostras cirúrgicas clínicas de carcinoma hepatocelular primário. Os resultados positivos do ensaio FASAY foram encontrados em 15 casos, com uma taxa de mutação do gene p53 de 53,6%. A sequenciação do cDNA destas 15 amostras positivas mostrou mutações do gene p53, enquanto que nenhuma mutação genética foi detectada em 13 amostras negativas do FASAY. Os resultados sugerem que o FASAY é uma técnica sensível para detectar mutações estruturais e funcionais no gene p53 no HCC. Muitos estudos encontraram uma correlação significativa entre a presença de anticorpos P53 e a acumulação de proteína P53 e mutações p53, de modo que a presença de mutações p53 também pode ser inferida a partir da detecção relativamente simples do estado de anticorpos P53 no soro. Os autores concordam que a técnica FASAY pode ser utilizada para rastrear as mutações p53 no HCC em grande escala e para estudar a sua actividade transcripcional, contribuindo em última análise para o diagnóstico, prognóstico e tratamento de doentes com tumor HCC. O ensaio do anticorpo sérico p53 é conveniente, preciso e específico, e pode ser aplicado clinicamente como diagnóstico auxiliar. 3 Relação entre a p53 e as características clínicas do carcinoma hepatocelular Guan Yongsong et al. utilizaram ELISA para quantificar a correlação entre o anticorpo sérico P53 e o sexo, idade, história de consumo de álcool, HbsAg, pontuação KPS, diagnóstico patológico, grau de diferenciação tumoral, cirrose, padrão de crescimento tumoral, estágio tumoral, invasão vascular, presença de metástases extra-hepáticas, classificação infantil, albumina sérica, AFP, ferritina sérica A correlação entre o tumor e o tumor foi encontrada. Concluiu-se que o anticorpo soro positivo P53 estava associado a baixa diferenciação tumoral (P = 0,020), metástase extra-hepática (P = 0,002), estágio tardio do tumor (P = 0,027), invasão vascular e outros indicadores que representam características biológicas pobres do tumor. Semelhante ao estudo anterior. 3.1 Relação entre p53 e o grau de diferenciação tumoral e estágio tumoral Guan Yongsong et al. concluíram que aqueles com baixa diferenciação patológica tinham uma taxa positiva de 66,7% de anticorpos P53, que era significativamente mais elevada do que aqueles com diferenciação elevada (25,0%) e intermédia (15,4%). A taxa de positividade de anticorpos P53 foi mais elevada naqueles com estágio avançado do tumor do que naqueles com estágio inicial. Estes resultados sugerem que os doentes com anticorpos positivos do soro P53 têm tumores pouco diferenciados, estádio tardio, e elevada malignidade. Estudos básicos também descobriram que a taxa de mutação do gene p53 era mais elevada no carcinoma hepatocelular pouco diferenciado, e as mutações do gene p53 eram mais frequentes nos estados avançados do tumor do que nos estados iniciais. Gong Ling et al. concluíram que a taxa de expressão positiva do p53 era significativamente mais elevada em tecidos com carcinoma hepatocelular pouco diferenciados do que naqueles com diferenciação alta e média (P=0,017). análise multifactorial do modelo de risco proporcional de Cox concluiu que o estádio clínico (P=0,028) era um factor prognóstico independente. 3.2 Relação entre a p53 e a vasculatura tumoral As experiências de Volpert et al. confirmaram que a mutação p53 aumentou a expressão do factor de crescimento endotelial vascular (VEGF) e diminuiu significativamente o supressor da angiogénese (TSP), sugerindo que a mutação p53 desempenha um papel importante na angiogénese tumoral. O estudo de Ren Yong também mostrou que a mutação p53 foi uma das causas da alta expressão do VEGF. Pode-se ver que a angiogénese dos tumores HCC está intimamente relacionada com a sua metástase e influenciada pela expressão VEGF. p53 pode afectar a angiogénese do HCC regulando a expressão do VEGF. Saffroy e Guan Yongsong Song concluíram ambos que os tumores são mais susceptíveis de invadir vasos sanguíneos em doentes com soro P53-positivo (P = 0,010). Não houve diferença significativa no comprimento do tumor entre pacientes P53-positivos e negativos (P>0,05 por teste de soma de classificação). 3.3 Relação entre p53 e AFP Saffroy não encontrou correlação entre os anticorpos P53 e AFP após análise de 130 doentes europeus com carcinoma hepatocelular. Um outro estudo realizado por Guan Yongsong et al [11] revelou que entre 41 doentes com AFP menos do que os critérios de diagnóstico de 400 μg/L, 10 foram positivos para os anticorpos P53. Estudos de biologia molecular também descobriram que as mutações no gene p53 podem aparecer no início do processo de carcinogénese hepatocelular, e aumentar gradualmente com o desenvolvimento tumoral. Portanto, podemos tirar partido da elevada especificidade do anticorpo P53, que pode complementar o AFP no diagnóstico do carcinoma hepatocelular e ajudar a diagnosticar doentes com AFP <400 μg/L; entretanto, para doentes com AFP >400 μg/L, o anticorpo P53 positivo pode melhorar a certeza do diagnóstico do carcinoma hepatocelular. Além disso, Shiota et al. analisaram 86 casos de CHC e descobriram que a positividade do anticorpo P53 estava associada à bilirrubina sanguínea e ao número de tumores, e não ao tamanho do tumor. 4 p53 e terapia genética do carcinoma hepatocelular A terapia genética abriu um novo caminho para o tratamento do carcinoma hepatocelular, e o gene p53 é o oncogene mais relevante para os tumores humanos. Nos últimos anos, as pessoas substituíram o gene p53 do tipo selvagem normal pelo gene p53 mutado em células tumorais, mostrando um melhor potencial de aplicação. Encontrar sistemas vectoriais eficientes e dirigidos é agora a chave para a aplicação clínica da terapia genética tumoral. 4.1 Os vectores virais incluem o adenovírus e o retrovírus. Reiser et al. demonstraram que a transferência genética mediada por adenovírus pode introduzir eficazmente o gene p53 nas células tumorais, e Terence et al. utilizaram um sistema de transferência genética mediada por receptores para transfectar uma linha celular de carcinoma hepatocelular do tipo selvagem p53 com p53 mutado e descobriram que inibia significativamente o seu crescimento. crescimento. Guo Ying et al. introduziram o gene p53 na linha celular do carcinoma hepatocelular – célulasPLC/PRE/5 expressando o vector adenoviral recombinante wtp53, e inibiram o crescimento das células induzindo a apoptose e a paragem do ciclo celular. No estudo de Shi Ming et al, foram observadas elevadas taxas de transfecção de adenovírus em células do carcinoma hepatocelular BEL402, HLE e HuH7, indicando que o adenovírus pode efectivamente introduzir o gene alvo em células do carcinoma hepatocelular e exprimi-lo eficientemente. 4.2 O vector lipossoma Zhu Guangyu et al. mostraram que a utilização do lipossoma como vector tem maior eficiência de transfecção do que a simples introdução de genes, e ao mesmo tempo, a quantidade de genes é proporcional à eficiência de transfecção dentro de um determinado intervalo. Ao mesmo tempo, o corpo hospedeiro não mostra uma resposta imunológica específica devido ao gene viral exógeno, o tempo de expressão é maior do que o do vector adenoviral, e tanto as células que dividem como as que não dividem podem ser transfectadas. O estudo de Lu Qin et al. demonstrou ainda que a transferrina pode melhorar a transfecção de lipossomas-gene. 4.3 Sistema de proteína de fusão PTD O sistema de proteína de fusão PTD é considerado como um veículo de entrega promissor. Ding Zhongyang et al. construíram com sucesso o gene p53 contendo o vector de expressão procariótica pTATHA/p53, induziu a expressão em E. coli BL21(DE3) LysS e purificou-o. A proteína p53 purificada foi imunizada intraperitonealmente em ratos BALB/c, e foi preparado um anti-soro altamente eficaz. Esta experiência lançou as bases teóricas para a aplicação da proteína PTD-p53 no estudo experimental do carcinoma hepatocelular. Além disso, Mu Hong et al. p53-cDNA plasmídeo de expressão eucariótica p53-pcDNA3 foi transfectado em células de carcinoma hepatocelular de origem humana da linha HepG2, e a transfecção e transcrição do p53-cDNA exógeno em células HepG2-p53 foram demonstradas pela hibridação in situ do RNA, e o p53-cDNA introduzido com sucesso poderia induzir apoptose em células HepG2, que tem boas perspectivas de aplicação da terapia genética tumoral. Um importante mecanismo de tumorigenese é a inactivação de oncogenes e/ou activação de oncogenes. A introdução do oncogene p53 normal nas células tumorais para substituir e compensar o gene defeituoso pode inibir fundamentalmente o crescimento tumoral. O oncogene p53 irá definitivamente desempenhar um papel importante no diagnóstico e tratamento do cancro do fígado.