Correntemente, de acordo com os critérios de classificação da Organização Mundial de Saúde para leucemia, citomorfologia (M), imunologia (I), genética (C) e métodos de análise biológica molecular (M) são necessários para fazer um diagnóstico e classificação mais precisos, para melhor ajudar a seleccionar mais opções de tratamento, para determinar a intensidade e duração do tratamento, para julgar a eficácia, e para estimar o resultado futuro (prognóstico) do tratamento.
>br />Análise morfológica é a observação da medula óssea e células sanguíneas, ou a morfologia e estrutura do tecido da medula óssea por um técnico sob um microscópio. Os métodos morfológicos são fáceis, rápidos e económicos, sendo o método de diagnóstico mais básico para doenças malignas do sangue e são geralmente utilizados em hospitais. Na maioria dos casos, os médicos tomam principalmente uma pequena quantidade de suspensão de células da medula óssea para observar a morfologia celular e depois realizam a coloração citoquímica. Por vezes, para compreender a estrutura dos vários tecidos do tecido da medula óssea, a proporção de tecido hematopoiético, e para observar algumas células difíceis de extrair, o médico recolhe pequenos pedaços de tecido da medula óssea (chamados biópsias) para exame patológico. Os métodos morfológicos podem diagnosticar mais de 90% das leucemias agudas, e algumas estimativas preliminares podem ser feitas para as leucemias crónicas. O diagnóstico de leucemia aguda é determinado principalmente pela proporção de células primitivas em relação a todas as células nucleadas, pelo que algumas leucemias agudas precoces podem não ser diagnosticadas se o diagnóstico de leucemia aguda se basear apenas neste critério. Os métodos morfológicos são menos precisos para a tipagem de leucemia aguda. Foi relatado que sete morfologistas de topo de hematologia de França, Reino Unido e Estados Unidos (FAB) tiparam as mesmas amostras de leucemia aguda e apenas concordaram com a tipagem de cerca de 70% das amostras, o que significa que cerca de 30% dos casos foram difíceis de tipar correctamente através de análise morfológica. O erro é ainda maior se o técnico for um analista morfológico geral. Além disso, é difícil diagnosticar e tipificar com precisão a leucemia crónica utilizando apenas a análise morfológica.
O método de análise imunológica utiliza principalmente múltiplos anticorpos monoclonais para rotular os antigénios das células, depois citometria de fluxo para detectar múltiplos marcadores na superfície celular ou dentro das células e armazenar os dados no computador, e finalmente analisar estes dados com algum software de análise para classificar as células em grupos. Utilizando a análise imunológica em cima da análise morfológica celular, a precisão da tipagem para leucemia aguda pode atingir mais de 90%. É possível distinguir com precisão se as células malignas são derivadas de linfócitos T e B, células mielóides, e é possível diferenciar a leucemia aguda da leucemia crónica. A análise imunológica desempenha um papel fundamental no diagnóstico de algumas doenças linfocitárias crónicas em série e no seu estadiamento. Morfologicamente, é difícil distinguir a leucemia linfocítica crónica e alguns linfomas malignos de baixo grau da linfocitose benigna, como as infecções virais, enquanto a análise imunológica pode diferenciar melhor se as células são benignas ou malignas.
Immunoensaio também pode detectar um número muito pequeno de células malignas (também conhecidas como lesões residuais microscópicas), e se houver uma célula maligna em 10.000, pode ser detectada por citometria de fluxo. Uma vez que a maioria das células de leucemia tem alguns marcadores imunológicos anormais, este método pode ser utilizado para detectar células residuais de leucemia na maioria dos doentes.
>br />Métodos genéticos são utilizados para descobrir se as células malignas têm anomalias cromossómicas através da análise do cariótipo das células de leucemia mielóide ou pela detecção de certos sítios cromossómicos com sondas. A análise cromossómica de pacientes é cada vez mais valorizada por clínicos e investigadores pelo seu valor diagnóstico independente, pelo seu valor em ajudar a seleccionar o tratamento e pelo seu valor em prever a eficácia do tratamento. Por exemplo, para diagnosticar a leucemia mielóide crónica é necessário ter t(9;22) ou anomalias envolvendo o cromossoma 22, ou ter estas anomalias formando um gene de fusão bcr/abl, caso contrário o diagnóstico não pode ser feito. Se um doente tiver algumas anomalias cromossómicas específicas da leucemia aguda, tais como t(8;21), t(15;17), e inv(16), pode ser feito um diagnóstico precoce da leucemia aguda mesmo que as células primitivas não cumpram os critérios para a leucemia aguda. Então, por exemplo, a leucemia promielocítica aguda com anormalidades cromossómicas t(15;17) é bem tratada com vincristina e arsénico, e os doentes com anormalidades cromossómicas t(8;21), inv(16), fazem bem com ciarabina de dose elevada e podem ser tratados sem primeiro escolher o transplante; enquanto a leucemia linfoblástica aguda com anomalias cromossómicas t(9;22), os pacientes com anomalias cromossómicas complexas, -5, e -7 e outras anomalias cromossómicas são muito ineficazes com quimioterapia e devem ser tratados com transplante de células estaminais hematopoiéticas o mais cedo possível. Portanto, os mais recentes protocolos de tipagem da OMS para doenças hematológicas malignas colocam as anomalias cromossómicas e/ou genéticas numa posição muito importante. Os métodos de análise genética são os testes mais específicos, e uma vez detectado um cromossoma anormal clonado, há um elevado grau de certeza de que a célula tem uma anomalia. No entanto, muitas células malignas não podem ser detectadas para terem cromossomas anormais.
>Análise biológica molecular pode detectar a presença ou ausência de anomalias genéticas nas células de leucemia. Tal como nos métodos genéticos, a tipagem da biologia molecular tem um valor de diagnóstico e prognóstico independente. Algumas anomalias cromossómicas podem dar origem a genes específicos de células leucémicas, pelo que é possível responder a anomalias cromossómicas detectando estes genes específicos da leucemia, tais como as translocações t(9;22) que dão origem a genes de fusão bcr/abl, as translocações t(15;17) que dão origem a genes de fusão PML/RARα, e as anomalias t(8;21) que dão origem a genes de fusão AML1/ETO. Além disso, por vezes as células de leucemia são cromossomicamente normais e a análise biológica molecular pode detectar alguns genes anormais ou mutantes, tais como FLT3, WT1, NPM, etc. Estas anomalias genéticas podem ajudar a seleccionar o tratamento e a julgar o efeito do tratamento e o desenvolvimento futuro. A análise biológica molecular é o método mais sensível, detectando uma célula anormal em cada 100.000 células, mas a especificidade não é tão boa como a análise genética. Além disso, cada gene anormal deve ser estudado e analisado para sequência genética antes de se poder conceber um teste de rotina clínica.
Em conclusão, cada um dos métodos acima referidos tem as suas próprias vantagens e desvantagens, e cada método pode reflectir as características das células de diferentes aspectos, que podem ser integradas para reflectir as características das células de forma mais abrangente e ajudar melhor a seleccionar o tratamento, julgar o prognóstico e julgar a eficácia do tratamento.