Construção de um gene de fusão imunoglobulina-citocina para uma vacina anti-linfoma específica da família…

  Objectivo: Construir um vector de expressão do gene de fusão da região da cadeia pesada de imunoglobulina variável (IgHV) fragmento de gene e citocinas GM-CSF (granulocyte colony-stimulating factor) ou IL-2 (interleukin 2) como uma vacina anti linfoma de ácido nucleico específico da família, e inocular animais para compreender a função imunitária anti-linfoma desta vacina.  MÉTODOS: Seis fragmentos de fragmentos de genes IgHV3 com comprimentos de fragmentos muito variáveis foram obtidos a partir de uma biblioteca de genes de imunoglobulina do sangue do cordão umbilical, sequenciados e depois utilizados para análise bioinformática de recursos para prever epitopos de células T nas suas regiões de cadeia pesada variável, enquanto 16 fragmentos de IgHV previamente construídos no nosso laboratório foram analisados. Os genes IgHV1 e IgHV3, que contêm a maioria dos epítopos de células T, foram seleccionados, e o fragmento de gene IgHV(FR) dominado pela região da estrutura (FR) e o gene de fusão formado pela ligação dos genes IgHV(FR) ao gene GM-CSF ou IL-2 foram clonados em vectores de expressão eucariótica. Os vectores de expressão foram transformados em células COS por lipossomas e a expressão de GM-CSF ou IL-2 foi determinada por ELISA. Alguns vectores de expressão foram utilizados como vacinas de ácido nucleico para imunizar ratos, e as respostas imunitárias contra linfomas e linfócitos normais da mesma família foram medidas por ensaios de imunofluorescência indirecta e de secreção de citocinas.  RESULTADOS: As previsões do sistema de pontuação por computador mostraram que cerca de 30 epítopos de células T restringidos por HLA loci estavam presentes em cada sequência IgHV, e mais de 90% dos epítopos de células T estavam localizados na região da estrutura, sendo que os primeiros 10% dos epítopos de células T na classificação de pontuação estavam localizados na região da estrutura. Os vectores de expressão eucariótica para IgHV1(FR) e IgHV3(FR) foram construídos com sucesso com a região da moldura (FR) predominantemente removida da região do CDR3. A expressão de GM-CSF em IgHV(FR)-GM-CSF/pcDNA3.0 foi mais de 200 vezes superior à do controlo; a expressão de IL-2 em IgHV(FR)-IL-2/pcDNA3.0 foi mais de 60 vezes superior à do controlo. Foram detectados anticorpos contra o linfoma Namalwa pertencentes à família IgHV1 no grupo de animais imunizados IgHV1(FR)-IL-2 a partir da semana 2 após a primeira imunização, e foram detectados anticorpos contra a linhagem celular Namalwa no grupo IgHV1(FR) a partir da semana 4. foram detectados anticorpos contra o linfoma Namalwa pertencentes ao grupo IgHV3(FR)-IL-2 na semana 2 após a primeira imunização. foram detectados anticorpos contra o linfoma Namalwa pertencentes à família IgHV3(FR)-IL-2 no grupo IgHV3(FR)-IL-2 a partir da semana 2 após a primeira imunização. O grupo IgHV(FR)-IL-2 tinha níveis significativamente mais elevados de soro IFN-γ do que os grupos pcDNA3.0 e IgHV(FR).