A trombocitemia primária e a mielofibrose primária são tipos comuns de neoplasias mieloproliferativas (NMP). A ativação mutacional da Janus quinase 2 (JAK2) está associada a 50-60% dos casos de NMP; a causa subjacente de cerca de 30% dos casos de NMP permanece desconhecida. Recentemente, um estudo afirmou que as mutações na calreticulina (CALR) ocorrem na maioria dos doentes com NMP com inativação da JAK2 (doença JAK2). No estudo, os investigadores realizaram a sequenciação completa do exoma de amostras de seis doentes com mielofibrose primária e descobriram que as mutações CALR estavam presentes em todas as amostras de tumores. Duas das amostras apresentavam uma supressão no exão 9 (uma supressão de 52 pb, classificada como mutação de tipo 1) e quatro amostras apresentavam uma inserção de 5 pb no exão 9 (uma mutação de tipo 2). Para além disso, os doentes com mutações CALR, incluindo os de uma coorte adicional, apresentavam mutações JAK2- e CALR em 88% dos casos de JAK2-MPN. No total, os investigadores identificaram 36 mutações CALR diferentes (na sua maioria mutações de tipo 1 e 2), todas elas conduzindo a um quadro de leitura alternativo de código deslocado 1, que se prevê ser capaz de alterar o domínio estrutural carboxi-terminal. As mutações de tipo 1 estão muito associadas à mielofibrose primária, o que significa que os dois tipos de mutações podem ter efeitos diferentes. A expressão ectópica de uma classe de proteínas mutantes 1 confere à interleucina-3 (IL-3) um crescimento independente das células, que parece resultar da ativação do sensor de sinalização JAK e da sinalização do catalisador de transcrição 5 (STAT5). No total, os autores investigaram 1215 doentes com trombocitemia primária ou mielofibrose primária; 23,5% destes doentes apresentavam mutações CALR e os doentes com doença CALR+ tinham uma sobrevida global mais longa do que os doentes com doença JAK2+. Além disso, os investigadores realizaram a sequenciação do exoma completo de 151 amostras adicionais de NMP e encontraram inserções e deleções do exão 9 de CALR em 26 de 31 doentes com trombocitemia primária JAK2 ou mielofibrose primária; foram encontrados resultados semelhantes numa população maior. As amostras de mielofibrose primária foram as mais comuns. Curiosamente, estes resultados sugerem que a trombocitémia primária CALR+ tem uma maior incidência de transformação em mielofibrose em comparação com a doença JAK2+. Análises adicionais mostraram também que a mutação CALR ocorreu no compartimento das células estaminais hematopoiéticas e que foi um acontecimento precoce nos cinco doentes que foram submetidos à experiência, o que significa que pode ser uma mutação determinante. Os investigadores identificaram 19 mutações CALR diferentes e também previram que cada mutação afectava o domínio estrutural carboxi-terminal. Prevê-se que estas mutações resultem na supressão de um motivo KDEL, capaz de se localizar no retículo endoplasmático, e que afectem de forma variável a acidez deste domínio estrutural. No entanto, a expressão ectópica das mutações CALR de tipo 1 e de tipo 2 em células HEK293T revelou que a localização subcelular de CALR não foi afetada pelas mutações, pelo que são necessários mais estudos para determinar por que razão as mutações de tipo 1 e de tipo 2 em CALR são oncogénicas. Em resumo, estes artigos foram acrescentados à lista de potenciais causas de alterações nas NMP. Será interessante descobrir se estas alterações têm algum impacto no tratamento. O gene CALR pode tornar-se um novo marcador molecular para o estudo LBA-1 das NMP: a alteração genética mais comum nas neoplasias mieloproliferativas (NMP) é a mutação JAK2 V617F, observada em 95% das eritrocitoses verdadeiras (VP) e em 50% a 60% da trombocitemia primária (TE) ou da mielofibrose primária (PMF). As mutações do gene do recetor de plaquetas (MPL) são observadas noutros 5-10% dos doentes. Faltam marcadores moleculares específicos para os cerca de 40% de doentes com JAK2 de tipo selvagem e MPL ET e PMF. Klampfl Thorsten, MD, PhD, do Centro de Medicina Molecular da Academia Austríaca de Ciências, aplicou a sequenciação de genes de exões completos para detetar inserções e deleções reprodutíveis do gene CALR, que codifica a proteína calreticulina, em pacientes com PMF com JAK2 e MPL de tipo selvagem. Os investigadores analisaram então 1107 doentes com NMP para detetar mutações de inserção e/ou deleção no exão 9 do gene CALR; não foram detectadas mutações em doentes com PV, e as mutações CALR ocorreram todas em doentes com ET (67%) e PMF (88%) com JAK2 e MPL de tipo selvagem. Além disso, os investigadores não detectaram mutações CALR exon 9 em 254 leucemias mielóides agudas primárias (LMA), 45 leucemias mielóides crónicas (LMC), 73 síndromes mielodisplásicas (SMD) e 64 leucemias granulomonocíticas crónicas. Os doentes com ET e PMF com mutações CALR tinham tendência para apresentar contagens de glóbulos brancos mais baixas e contagens de plaquetas mais elevadas do que os doentes com mutações JAK2. Independentemente da ET ou PMF, os mutantes CALR tiveram melhor sobrevivência global (OS) do que os mutantes JAK2. Os doentes com ET com mutações CALR tiveram uma menor incidência de trombose do que os doentes com mutações JAK2. Por conseguinte, as mutações CALR são marcadores moleculares específicos para doentes com NMP com mutações JAK2 e MPL negativas, e a sua aplicação clínica melhorará o diagnóstico da doença e informará as escolhas terapêuticas. Estudo LBA-2: Os investigadores do Projeto Genoma do Cancro do Reino Unido utilizaram a sequenciação do exoma/genoma para avaliar o estado do gene CALR em 3412 amostras, e a sequenciação do exoma de 151 amostras de doentes com NMP revelou que a maioria (26/31) dos doentes com NMP sem mutações JAK2 ou MPL apresentava mutações somáticas no CALR. Considerando que as mutações CALR e JAK2 e MPL não podiam coexistir, apenas uma destas 3 mutações estava presente em 97% dos doentes. Num estudo subsequente alargado (1345 doentes com neoplasias hematológicas, 1517 doentes com outros tumores e 550 controlos normais), os investigadores descobriram que as mutações CALR estavam presentes em 71% dos doentes com ET, 56% dos doentes com PMF, 86% dos doentes com mielofibrose após ET e 8% dos doentes com MDS, enquanto que noutros tumores mielóides, linfóides ou sólidos, as mutações eram negativas para CALR. As mutações CALR foram também encontradas em células estaminais/progenitoras hematopoiéticas altamente purificadas de cinco doentes com NMP, pelo que esta mutação pode ser a mutação que causa a doença. Comentário As NMP são um grupo de doenças hematológicas comuns com uma incidência crescente de ano para ano, e a idade de início tende a ser progressivamente mais jovem, o que torna imperativo melhorar o diagnóstico e o tratamento individualizado destas doenças. No entanto, em comparação com outras doenças hematológicas malignas, os progressos da investigação neste domínio têm sido menos significativos nos últimos anos. Exceptuando as mutações JAK2 e MPL, que se tornaram marcadores moleculares importantes e melhoraram o diagnóstico de algumas NMP, não foram encontrados marcadores moleculares específicos para quase metade das ET e PMF. Os resultados destes dois estudos foram muito inovadores e suscitaram grande interesse por parte dos especialistas participantes. Um rastreio de sequências identificou uma mutação somática na chaperona molecular do retículo endoplasmático CALR na maioria dos doentes com NMP JAK2 de tipo selvagem. Embora a calreticulina seja a principal proteína de ligação ao cálcio no retículo endoplasmático, está envolvida na regulação da apoptose, da adesão, da imunidade e de outros processos, ajudando na correcta dobragem das proteínas e na manutenção da homeostase do cálcio celular. As mutações na CALR levam à produção de um novo terminal C da proteína, o que resulta em alterações na função da proteína. Em linhas celulares transfectadas, a agregação da calreticulina no Golgi ou na superfície celular é reduzida. Estes resultados fornecem novas ideias para desvendar a patogénese dos doentes com NMP com mutação JAK2 negativa, sendo necessários mais estudos para confirmar o papel e o significado das mutações CALR na patogénese da NMP. Espera-se que as mutações CALR melhorem ainda mais o diagnóstico das NMP e, devido ao seu significado clínico especial, podem constituir uma base importante para o tratamento individualizado das NMP e para uma eventual investigação terapêutica orientada. Mutações na calreticulina e neoplasias mieloproliferativas A trombocitemia primária e a mielofibrose primária são tipos comuns de neoplasias mieloproliferativas (NMP). A ativação mutacional da Janus quinase 2 (JAK2) está associada a 50-60% dos casos de NMP; a causa subjacente de aproximadamente 30% dos casos de NMP permanece desconhecida. Dois artigos afirmam agora que as mutações na calreticulina (CALR) ocorrem na maioria dos doentes com NMP com inativação da JAK2 (doença JAK2). Klampfl et al. concluíram a sequenciação do exoma completo de amostras correspondentes de seis doentes com mielofibrose primária e, por sua vez, descobriram que as mutações CALR estavam presentes em todas as amostras de tumores. Duas das amostras apresentavam uma supressão no exão 9 (uma supressão de 52 pb, classificada como mutação de tipo 1) e quatro amostras apresentavam uma inserção de 5 pb no exão 9 (mutações de tipo 2). Para além disso, os doentes com mutações CALR, incluindo os de uma coorte adicional, apresentavam mutações JAK2- e CALR em 88% dos casos de JAK2-MPN. No total, Klampfl et al. identificaram 36 mutações CALR diferentes (maioritariamente mutações de tipo 1 e 2), todas elas conduzindo a um quadro de leitura alternativo 1 com desvio de código, que se prevê poder alterar o domínio estrutural carboxi-terminal. As mutações de tipo 1 estão muito associadas à mielofibrose primária, o que significa que os dois tipos de mutações podem ter efeitos diferentes. A expressão ectópica de uma classe de proteínas mutantes 1 confere à interleucina-3 (IL-3) um crescimento independente das células, que parece resultar da ativação do sensor de sinalização JAK e da sinalização do catalisador de transcrição 5 (STAT5). No total, os autores investigaram 1215 doentes com trombocitemia primária ou mielofibrose primária; 23,5% destes doentes tinham mutações CALR e os doentes com doença CALR+ tinham uma sobrevida global mais longa do que os doentes com doença JAK2+. Nangalia et al. concluíram a sequenciação do exoma completo de 151 amostras de NMP e encontraram inserções e deleções do exão 9 do gene CALR em 26 de 31 doentes com trombocitemia primária JAK2 ou mielofibrose primária; foram encontrados resultados semelhantes numa população maior. As mutações de tipo 1 e 2 foram as mais comuns, e as mutações de tipo 1 foram novamente encontradas em doentes com mielofibrose primária. As mutações do tipo 1 foram, por sua vez, mais comuns em amostras de mielofibrose primária. Curiosamente, estes autores verificaram que a trombocitemia primária CALR+ tinha uma maior incidência de transformação em mielofibrose em comparação com a doença JAK2+. Análises adicionais mostraram também que a mutação CALR ocorreu no compartimento das células estaminais hematopoiéticas e que foi um evento precoce nos cinco doentes que foram submetidos à experiência, o que implica que pode ser uma mutação determinante. Nangalia et al. identificaram 19 mutações CALR diferentes e também previram que cada mutação afectava o domínio estrutural carboxi-terminal. Prevê-se que estas mutações resultem na supressão de um motivo KDEL, que é capaz de se localizar no retículo endoplasmático e afetar de forma variável a acidez deste domínio estrutural. No entanto, a expressão ectópica das mutações CALR de tipo 1 e de tipo 2 em células HEK 293T revelou que a localização subcelular de CALR não foi afetada pelas mutações, pelo que são necessários mais estudos para determinar por que razão as mutações de tipo 1 e de tipo 2 em CALR são oncogénicas. Em resumo, estes artigos foram acrescentados à lista de potenciais causas de alterações nas NMP. Será interessante descobrir se estas alterações têm algum impacto no tratamento