A recolha de sémen deve ser efectuada 3-7 dias após a descarga do sémen e deve também incluir a abstenção de fumar e álcool, e evitar o consumo de drogas que tenham um efeito na produção de esperma. A melhor altura para recolher o sémen é de manhã. Antes de recolher o sémen, lave as mãos e a zona púbica, especialmente a glande, com água quente. A masturbação ou ejaculação eléctrica pode ser utilizada para induzir a descarga de sémen. A primeira parte do sémen vem da próstata, do epidídimo e da jugular, acompanhada de um grande número de espermatozóides, e a última parte vem das vesículas seminais, pelo que todo o sémen deve ser colhido sem faltar nenhuma parte, especialmente a primeira parte. Devido à tendência para perder a primeira parte do sémen, não é possível recolher o sémen por meio da ejaculação externa. O recipiente de sémen deve estar limpo, estéril e seco, e a temperatura do recipiente deve ser a mesma que a temperatura ambiente antes da recolha; a garrafa não deve ser demasiado grande, mas a boca da garrafa não deve ser demasiado pequena para evitar ejacular o sémen para fora da garrafa; deve também ser rotulado para registar o nome e a hora da recolha. Nos dias frios, o espécime de sémen deve ser mantido quente, colocado num saco de roupa interior fechado, não inclinado ou invertido, e entregue ao laboratório no prazo de uma hora, se possível.