Normalmente, o segundo rastreio é normalmente melhor feito por volta das 28-32 semanas de gravidez. O segundo teste de rastreio é feito para verificar o desenvolvimento do coração, pulmões e cérebro do feto, bem como de outros órgãos do feto. O segundo rastreio também é feito para descobrir a posição do feto, a posição e maturidade da placenta, e o estado do líquido amniótico, e é normalmente feito às 28-32 semanas de gravidez. Com cerca de 24 semanas de gestação, realiza-se o primeiro teste de rastreio, mas neste momento os órgãos fetais só se estão a desenvolver inicialmente e ainda não podem apresentar hidrocefalia, malformações cardíacas, desenvolvimento pulmonar anormal, etc. Por conseguinte, ainda é necessário outro teste de rastreio no segundo trimestre. O segundo teste de rastreio é realizado no segundo trimestre, quando o feto é maior e tem menos espaço para se movimentar no útero, e a quantidade de líquido amniótico no segundo trimestre é relativamente pequena, pelo que é impossível descobrir o desenvolvimento de todos os órgãos do feto e não pode substituir o primeiro teste de rastreio.
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