Investigar o mecanismo do efeito anti-inflamatório dos grânulos inflamatórios pélvicos sobre a doença inflamatória pélvica crónica em ratos causada por bactérias mistas mais lesões mecânicas. MÉTODOS: O modelo da doença inflamatória pélvica crónica do rato foi replicado por bactérias mistas mais método de lesão mecânica e aleatoriamente dividido em grupo normal, grupo operado por sham-operated, grupo modelo, grupo de rede inflamatória pélvica e grânulos inflamatórios pélvicos de alta, média e baixa dose. RESULTADOS: Os grânulos inflamatórios pélvicos reduziram significativamente o nível sérico de IL-6 e aumentaram significativamente o nível sérico de IL-4 nos ratos modelo.
CONCLUSÃO: O mecanismo do efeito anti-inflamatório dos grânulos inflamatórios pélvicos em ratos modelo pode ser o de reduzir os níveis séricos de factores pró-inflamatórios e simultaneamente aumentar os níveis de factores anti-inflamatórios, restaurando assim o equilíbrio dos factores inflamatórios e reduzindo a resposta inflamatória local e a fibroplasia.
Doença inflamatória pélvica crónica; Granulado inflamatório pélvico; Citocinas inflamatórias
A doença inflamatória pélvica crónica é uma doença comum e frequente em ginecologia, caracterizada por dor abdominal, hipocôndrio, espessamento dos tecidos pélvicos, aderências e formação de massa. É frequentemente recorrente e persistente, e a sua prevenção e tratamento tornou-se uma questão importante a ser resolvida no campo da ginecologia. No presente estudo, o efeito dos grânulos inflamatórios pélvicos nas citocinas inflamatórias do soro em ratos foi observado com base no estudo experimental anterior, de modo a investigar o mecanismo do efeito anti-inflamatório da activação do sangue e do método tónico renal.
1. materiais e métodos
1.1 Animais experimentais
Sessenta e cinco ratos Wistar fêmeas de grau SPF, pesando 200±20g, foram adquiridos no Centro Animal Experimental da Universidade de Medicina Chinesa de Shandong, Certificado Animal No.: SCXK(LU)20050015.
1.2 Drogas experimentais
Granulado inflamatório pélvico: fornecido pela sala de preparação do Hospital Afiliado da Universidade de Medicina Tradicional Chinesa de Shandong. A composição do medicamento é Dan Shen, Red Peony, Raw Pu Huang, Fried Ganoderma, Cuscuta, Cornu Cervi Pantotrichum, Forsythia e Aromatic Herb. Granulado Inflamatório Pélvico: Produzido pela Kunming Jieda Pharmaceutical Co., Ltd, com o número de aprovação: Número de Registo de Medicamentos do Estado Z20013124. Os principais ingredientes são Lonicera japonica, Gynostemma lucidum, Yimouzuo, Chuanxiong, espinha de cão, etc. A dosagem adulta de Granulado Inflamatório Pélvico e Granulado Puro Inflamatório Pélvico são ambos 30g/dia, preparados como suspensão com água destilada, contendo 325mg de fármaco por ml.
1.3 Reagentes experimentais
Interleucina-4 (IL-4) e interleucina-6 (IL-6) kits de teste ELISA, produzidos pela ADL, EUA; estirpes: Escherichia coli, Staphylococcus aureus e Streptococcus hemolyticus tipo B em 2:1:1 dissolvidos em solução salina estéril para fazer uma suspensão bacteriana mista de 3 mil milhões/ml, fornecida pela sala de estirpes da Estação Provincial de Saúde e Prevenção de Epidemias de Shandong.
1.4 Método de teste
1.4.1 Método de replicação do modelo [Após anestesia abdominal com 3% de pentobarbital sódico (40mg/kg), em condições assépticas, foi feita uma incisão mediana no abdómen inferior, com 1cm de comprimento, o útero foi exposto e fixado através da abertura do abdómen, 0,2ml da suspensão bacteriana mista foi extraído com uma seringa de 1ml, o tecido endometrial foi mecanicamente danificado com a seringa, depois 0,1mL de suspensão bacteriana foi injectado no útero bilateral respectivamente, e a incisão foi suturada. No grupo operado por uma farsa, o abdómen foi aberto após anestesia e 0,1mL de água de injecção estéril foi injectada em cada lado do útero e depois o abdómen foi fechado.
1.4.2 Agrupamento e método de administração de drogas Oito ratos foram seleccionados aleatoriamente entre 65 ratos como o grupo de controlo normal, oito como o grupo operado por fraude, e os restantes 49 ratos participaram na moldagem. Os restantes ratos foram divididos aleatoriamente em 8 ratos, cada um no grupo de inflamação pélvica de alta dose, inflamação pélvica de média dose, inflamação pélvica de baixa dose, inflamação pélvica de baixa dose e inflamação pélvica de modelo. Após a moldagem, foram mantidos durante 2 semanas e a administração de drogas foi iniciada.
O grupo de peletização inflamatória pélvica recebeu 6,48g/kg/dia, 3,24g/kg/dia e 1,62g/kg/dia de preparação de peletização inflamatória pélvica por gavagem nos grupos de dose grande, média e pequena respectivamente; o grupo de peletização inflamatória pélvica recebeu 3,24g/kg/dia de preparação de peletização inflamatória pélvica por gavagem; o grupo de controlo, o grupo modelo e o grupo de operação sham foram todos receberam 1ml/100g/dia de água destilada por gavagem sem tratamento especial. O medicamento foi administrado uma vez por dia durante 14 dias.
1.4.3 Parâmetros do teste Os ratos de cada grupo foram jejuados no início da manhã do 15º dia após a administração de drogas, e 4-5 ml de sangue foram tirados do coração fixando os animais num tubo de ensaio com anticoagulante. O sobrenadante foi separado por centrifugação (3000 r/m in) durante 10 min e armazenado a -30°C para análise imunológica por ELISA.
1.4.4 Métodos estatísticos Foi utilizado o software estatístico SPSS17.0. Os dados de medição foram expressos sob a forma de média ± desvio padrão ( ±s) utilizando o teste t, e a comparação entre múltiplos grupos foi analisada pela ANOVA, com P<0.05 como diferença significativa e P<0.01 como diferença muito significativa.
2. resultados
2.1 Resultados da detecção da concentração de soro IL-6 em ratos de todos os grupos
Os resultados experimentais mostraram que a concentração sérica de IL-6 em ratos com doença inflamatória pélvica era significativamente mais elevada do que a de ratos normais (P<0,01), ao passo que não havia diferença significativa entre os ratos operados com uma farsa e o grupo de controlo normal (P>0,05). O grupo de pellets inflamatórios pélvicos e todos os grupos de doses de pellets inflamatórios pélvicos podiam reduzir significativamente as suas concentrações (P<0,01), entre os quais o efeito dos grupos de doses médias e altas de pellets inflamatórios pélvicos e do grupo de pellets inflamatórios pélvicos era o mais significativo, com concentrações próximas dos níveis normais (P>0,05), e o grupo de doses pequenas de pellets inflamatórios pélvicos era significativamente mais elevado do que o grupo de pellets inflamatórios pélvicos (P<0,01).
Tabela 1 Expressão da interleucina-6 (IL-6) do soro em ratos de cada grupo ( ±s)
Grupo
n
Interleucina-6 (ng/L)
Grupo normal
8
118.23±10.82||
Grupo de operação fraudulenta
8
122.23±23.22||
Grupo modelo
8
205.08±24.67※※▲▲
Grânulos inflamatórios pélvicos grupo de alta dose
8
126.91±11.94||
Grânulos inflamatórios pélvicos grupo de dose média
8
131.99±14.82||
Pellets inflamatórios pélvicos grupo de baixa dose
8
177.34±9.98※※||▲▲
Grupo da rede inflamatória pélvica
8
130.88±13.29||
Nota: Em comparação com o grupo normal, ※P<0.05, ※※P<0.01; em comparação com o grupo modelo, |P<0.05, |||P<0.01; em comparação com o grupo rede inflamatória pélvica, ▲P<0.05, ▲▲P<0.01; o mesmo abaixo.
2.1 Os resultados da detecção das concentrações de soro IL-4 em ratos de cada grupo (ver quadro 2)
Os resultados experimentais mostraram que o nível sérico IL-4 de ratos no modelo inflamatório pélvico era significativamente inferior ao de ratos normais (P<0,01), enquanto que os ratos do grupo operado com simulacro não eram significativamente diferentes do grupo de controlo normal (P>0,05). Os níveis de pastilhas inflamatórias pélvicas aumentaram significativamente em todos os grupos de dose e grupo de rede inflamatória pélvica (P<0,01), enquanto que os níveis no grupo de alta dose de pastilhas inflamatórias pélvicas estavam próximos do normal (P>0,05) e os níveis nos grupos de média e baixa dose de pastilhas inflamatórias pélvicas estavam próximos dos do grupo de rede inflamatória pélvica (P>0,05).
Tabela 2 Concentração sérica de interleucina-4 (IL-4) de ratos em cada grupo ( ±s)
Grupo
n
Interleucina-4 (ng/L)
Grupo normal
8
130.62±21.14||▲▲▲
Grupo de operação fraudulenta
8
124.70±18.48||▲▲
Grupo modelo
8
55.42±10.99※※▲▲▲
Grânulos inflamatórios pélvicos grupo de alta dose
8
130.19±11.43||▲▲
Grânulos inflamatórios pélvicos grupo de dose média
8
89.07±16.64※※||
Grânulos inflamatórios pélvicos grupo de pequenas doses
8
78.61±12.15※※||
Grupo de pellets inflamatórios pélvicos
8
83.71±10.63※※||
3. discussão
Tem sido sugerido que algumas doenças inflamatórias pélvicas crónicas já não são patogénicas no seu desenvolvimento crónico e que as alterações patológicas na fase crónica são o resultado de uma resposta imunitária secundária à infecção bacteriana[2] e estão associadas a alterações anormais de factores imunitários tais como citocinas associadas, mediadores inflamatórios, radicais livres e células apoptóticas. As citocinas inflamatórias podem ser divididas em dois grupos principais: citocinas pró-inflamatórias tais como IL-6, IL-1, IL-8, IL-12 e factor de necrose tumoral (TNF) e citocinas anti-inflamatórias tais como IL-4, IL-10 e IL-13. As citocinas pró-inflamatórias promovem o desenvolvimento de inflamação, enquanto as citocinas anti-inflamatórias inibem a resposta inflamatória e promovem a reparação e regeneração dos tecidos. O equilíbrio dos dois influenciará o resultado do trauma e da inflamação dos tecidos.
A IL-6 é uma citocina com actividade mediadora da inflamação e é um importante factor inflamatório na fase inicial da inflamação. Promove a produção e activação de neutrófilos durante a infecção, a proliferação e diferenciação de células B e a produção de imunoglobulinas, e a proliferação e diferenciação de células T, induzindo a síntese e secreção de várias proteínas de fase aguda por várias células. Durante a fase inflamatória crónica, a IL-6 actua como factor de crescimento e maturação dos linfócitos para causar a desregulação imunitária dos tecidos locais e mediar ainda mais os danos e fibrose dos tecidos. A IL-4 activa as células T citotóxicas, uma citocina tipicamente produzida por células Th2, e é importante para o desenvolvimento de linfócitos T e B e para impulsionar a resposta imunitária humoral e a produção de anticorpos.
A doença inflamatória pélvica crónica é frequentemente recorrente e difícil de curar. Segundo a teoria da medicina chinesa de que “as doenças crónicas estão associadas à estase” e “as doenças crónicas estão associadas aos rins”, criámos grânulos inflamatórios pélvicos activando a estase sanguínea e tonificando o rim. O estudo mostrou que este medicamento pode melhorar a imunidade dos fluidos e células do corpo dos pacientes. Foi provado que a Pelviculite Granular pode reduzir significativamente os níveis de soro IL-1B, IL-8 e MCP-1 e aumentar significativamente os níveis de soro IL-10 em ratos modelo. Fibroplasia.
Os resultados desta experiência mostraram que o nível de IL-6 em ratos com doença inflamatória pélvica era significativamente superior ao do grupo normal e o nível de IL-4 era significativamente inferior ao do grupo normal, indicando que no processo patológico da doença inflamatória pélvica crónica, o equilíbrio entre factores pró-inflamatórios e factores anti-inflamatórios foi perturbado, e a produção excessiva de factores pró-inflamatórios e a ausência de factores anti-inflamatórios contrários levaram ao desenvolvimento de inflamação causando danos nos tecidos e fibroplasia, enquanto que os grupos de doses de grânulos inflamatórios pélvicos reduziram o nível de factores pró-inflamatórios em diferentes graus. Em contraste, cada dose de pellets inflamatórios pélvicos reduziu o nível de factor pró-inflamatório IL-6 e aumentou o nível de factor anti-inflamatório IL-4 em diferentes graus, fazendo evoluir o equilíbrio dinâmico da inflamação/anti-inflamação para o desaparecimento da inflamação e a redução de alterações patológicas, promovendo assim a cura da inflamação. Esta pode ser outra prova de que os grânulos inflamatórios pélvicos exercem o seu efeito anti-inflamatório ao restaurar o equilíbrio da rede desequilibrada de factores inflamatórios, que faz parte do mecanismo de acção da activação do sangue e do método tónico renal no tratamento desta doença.