Os tumores da bexiga têm a caraterística biológica de recorrência fácil, e o tratamento pós-operatório com instilação intravesical de fármacos na bexiga pode melhorar significativamente o prognóstico. No entanto, a quimioterapia continua a suscitar muitos problemas, entre os quais a multirresistência (MDR), que é um dos factores importantes de insucesso da quimioterapia, pelo que, nos últimos anos, a MDR se tornou um ponto de referência na investigação clínica e básica da oncologia. Uma variedade de factores pode causar a MDR, entre os quais o mecanismo da glicoproteína-P tem sido mais estudado e amplamente estudado, e a expressão da proteína é afetada por uma variedade de factores. Esta experiência observa a expressão do gene da multirresistência (MDR-1mRNA) ao nível dos genes e o seu efeito no comportamento biológico clínico. 1, Dados e Métodos 1.1 Indivíduos do estudo Todos os espécimes foram retirados de tecidos de tumores da bexiga ressecados cirurgicamente de doentes internados neste departamento de licenciatura entre janeiro de 1998 e dezembro de 1998, que foram detectados por cistoscopia antes da operação e confirmados por exame patológico. Tipo patológico: todos os 30 casos deste grupo eram carcinoma de células migratórias da bexiga, de acordo com a classificação patológica dos tecidos da OMS: G110 casos, G213 casos, G37 casos. Registaram-se 16 casos de tumores primários e 14 casos de tumores recorrentes após instilação intravesical de agentes quimioterapêuticos. Os controlos normais eram mucosa vesical normal para além de 2 cm da base do tumor da bexiga, que foram ressecados intra-operatoriamente e examinados histologicamente como normais. 1.2 Colheita e armazenamento de amostras de tecido Todas as amostras foram colhidas quando o tumor da bexiga foi removido durante a operação, e o tecido necrótico no centro do tumor foi evitado durante a amostragem. Amostras frescas dentro de 2 h após a operação foram usadas para os experimentos, ou as amostras foram colocadas em um refrigerador de temperatura ultrabaixa a -70 ℃ imediatamente após a remoção das amostras para serem preservadas para exame. 1.3 Reagentes principais: A transcriptase reversa AMV foi adquirida à Promega e a TaqDNA polimerase foi adquirida ao Instituto de Genética da Academia Chinesa de Ciências. 1.4 Instrumentos principais: Instrumento Gene Cycler PCR (B10-RAD, EUA). 1.5 Deteção do nível de expressão do gene de resistência a múltiplos fármacos (MDR1) Foi utilizada a RT-PCR quantitativa. 1.5.1 Extração de RNA total do tecido: a extração de RNA total nas amostras foi realizada pelo método de uma etapa do ácido isotiociânico e o RNA total extraído foi dissolvido pela adição de 50-100 μL de água desionizada DEPC e, em seguida, uma parte das amostras foi retirada para identificar a sua qualidade por deteção de eletroforese em gel de formaldeído e o A260 e A280 foram determinados por espetrofotometria UV, e A260 / A280 foi calculado, e os rácios foram todos superiores a 1,8, e o seu conteúdo de RNA foi calculado com base em A260. O rácio A260/A280 era superior a 1,8 e o teor de ARN foi calculado de acordo com A260. 1.5.2 Síntese de cDNA por transcrição reversa A reação de transcrição reversa foi realizada em um sistema de reação de 50 μL contendo 5 μL de RNA total, 0,5 μg de inibidor de RNAase (Rnasin 40 U, AMV 10 U, dNTP 40 μL) e 0,5 μg de inibidor de RNAase (Rnasin 40 U, AMV 10 U, dNTP 40 μL). 40 μL). A RT foi completada num banho de água a 42 ℃ durante 1 h. A enzima foi inactivada num banho de água a 95 ℃ durante 5 min e imediatamente colocada num banho de gelo, tendo sido adicionados 50 μL de DEPC para preparar um modelo para o cDNA utilizado para a PCR. 1.5.3 Reação de amplificação por PCR: A reação de amplificação por PCR foi realizada com dois pares de primers de oligonucleotídeos, um dos quais foi o primer MDR-1mRNAcDNA, sequência de primers: MDR-1mRNA justice: 5′-CCCATCATTGCAATAGCAGG-3′; antisense: 5′-GTTCAAACTTCTGCTCCTCA-3′. O primer de controlo interno da β2-microglobulina foi concebido com base na literatura, 5′-ACCCCCCACTGAAAAAGATGA3′-ATCTTCAAACCTCCATGATG. 1.5.4 Avaliação dos resultados da PCR: após a separação dos produtos da PCR por eletroforese, a amostra positiva deve apresentar três bandas com tamanhos de peso molecular de 300 pb e 170 pb, respetivamente, sendo 300 pb o padrão interno b2-MG, enquanto o produto de 170 pb é o gene do ARNm do MDR-1. O rácio da intensidade das duas bandas (MDR-1mRNA/b2MG) é o valor relativo da expressão do gene MDR-1mRNA, de acordo com o qual se pode avaliar a diferença no grau de expressão do MDR-1mRNA em cada amostra. 2. resultados As condições RT-PCR acima referidas foram aplicadas a 30 amostras de tumores da bexiga e a 26 tecidos normais da mucosa da bexiga, e a expressão do MDR-1mRNA em 26 amostras normais da mucosa da bexiga foi de 15,4%. 17/30 (56,7%) dos 30 tumores da bexiga foram positivos para o MDR-1mRNA, e as taxas de positividade dos tumores G1, G2 e G3 foram de 40%, 61,5%, 61,5%, 61,5% e 61,5%, respetivamente. As taxas de positividade dos tumores G1, G2 e G3 foram de 40%, 61,5% e 71,4%, respetivamente. 16 amostras de tumores primários tiveram uma taxa de positividade de 37,5% e 14 amostras de tumores recorrentes após quimioterapia tiveram uma taxa de positividade de 78,6%. Os resultados sugeriram que o tecido normal da mucosa da bexiga tinha expressão de ARNm de MDR-1 e que a expressão de ARNm de MDR-1 estava relacionada com o grau de diferenciação do tumor. Verificou-se um aumento significativo da expressão de MDR-1mRNA em tumores recorrentes após quimioterapia. 3, DISCUSSÃO A resistência das células tumorais da bexiga aos agentes quimioterapêuticos é um grande obstáculo à quimioterapia pós-operatória dos tumores da bexiga. A principal razão pela qual muitos tumores na clínica acabam por recidivar inevitavelmente após uma quimioterapia inicialmente eficaz é a resistência das células tumorais aos fármacos quimioterapêuticos. Os fármacos quimioterapêuticos habitualmente utilizados relacionados com o gene MDR1 incluem agentes alquilantes (por exemplo, BCNU, ME-CCNU, etc.), bases vegetais (por exemplo, Vincristina, VM26, etc.), antibióticos (por exemplo, mitomicina, Adriamicina, Bleomicina, etc.) e hormonas (por exemplo, dexametasona, etc.). Estes fármacos são geralmente compostos lipofílicos com grandes pesos moleculares e são habitualmente utilizados na terapêutica dos tumores da bexiga. Quando as células tumorais são resistentes a um destes fármacos, podem ser tolerantes a outros tipos de fármacos ao mesmo tempo, pelo que a expressão do gene MDR1 nos tumores da bexiga está intimamente relacionada com a resistência aos fármacos quimioterapêuticos.