A genealogia da medicina chinesa é uma disciplina baseada na investigação moderna da teoria da medicina chinesa, utilizando a impressão digital da medicina chinesa como base, os efeitos e a effectómica como conteúdo principal, e aplicando métodos de bioinformática para estabelecer a relação intrínseca entre a impressão digital da medicina chinesa e a qualidade e eficácia da medicina chinesa[1]. Este conceito foi introduzido pela primeira vez de forma sistemática e clara por Li Rong et al [2], que argumentaram que, em termos do tratamento dialético da medicina chinesa, é o sabor do medicamento que é utilizado e não os componentes químicos individuais. A eficácia dos medicamentos chineses à base de plantas para tonificar o Qi, revigorar o sangue, nutrir o Yin e fortalecer o baço resulta da composição global das substâncias contidas nos comprimidos de ervas ou no medicamento acabado. Os efeitos das ervas são o resultado da ação global dos grupos de substâncias contidas nas ervas ou nas formulações. As diferenças no número, qualidade e composição das substâncias contidas nestes grupos de substâncias terão um impacto na sua eficácia. Por conseguinte, para controlar a eficácia dos medicamentos chineses, não podemos concentrar-nos apenas num ou dois componentes químicos, mas devemos controlar os grupos de substâncias da receita como um todo. 1.1 Conteúdo da investigação e métodos de investigação sobre a relação entre o espetro e a eficácia dos medicamentos chineses 1.1 Conteúdo da investigação sobre a relação entre o espetro e a eficácia dos medicamentos chineses Com base nas teorias tradicionais da medicina chinesa e na experiência prática dos praticantes de medicina chinesa no passado, a maioria das fórmulas da medicina chinesa baseia-se no princípio de “governante, ministro, adjuvante e embaixador”. As fórmulas de ervas chinesas baseadas na teoria da medicina tradicional chinesa e na experiência prática dos praticantes de medicina tradicional chinesa são, na sua maioria, fórmulas compostas representadas pelo “governante, sujeito, coordenador”, que são mutuamente reguladas e coordenadas entre si. E mesmo as ervas isoladas exercem os seus efeitos medicinais através da sinergia dos múltiplos componentes químicos que contêm, tornando ainda mais difícil imaginar os ingredientes activos específicos contidos nas preparações compostas. A diversidade e complexidade da composição química dos medicamentos à base de plantas é a base material da sua eficácia[3]? O estudo da relação entre o espetro e a eficácia dos medicamentos chineses visa revelar a inter-relação entre os componentes químicos contidos nos medicamentos chineses e a sua eficácia através da inter-relação entre a impressão digital e a eficácia. Desde que a Administração Estatal de Medicamentos emitiu os “Requisitos técnicos para estudos de impressão digital de medicamentos injectáveis chineses (provisórios)”, o estudo da impressão digital de medicamentos chineses tornou-se um ponto quente na investigação e na indústria da medicina chinesa na China. A impressão digital dos medicamentos chineses à base de plantas refere-se à utilização de determinadas técnicas analíticas para obter perfis cromatográficos ou espectrais que possam marcar as características dos medicamentos chineses à base de plantas ou dos medicamentos chineses patenteados, com o objetivo de refletir a homogeneidade e a estabilidade da qualidade intrínseca dos medicamentos chineses à base de plantas e das preparações compostas com componentes complexos através desta técnica. No entanto, a maioria dos investigadores no domínio da recolha de impressões digitais centrou-se na aquisição de impressões digitais químicas e, ao recolher as impressões digitais, apenas determinados componentes químicos conhecidos são considerados qualitativa ou quantitativamente, mas não qualitativa ou quantitativamente em termos de potência. Por conseguinte, a fim de controlar a qualidade da eficácia dos medicamentos chineses, é necessário estabelecer uma ligação entre “espetro e eficácia”.1.2 Métodos de investigação sobre a relação entre o espetro e a eficácia dos medicamentos chineses Sun et al[3] consideraram que a impressão digital da medicina chinesa é uma disciplina que se baseia em técnicas analíticas modernas para obter impressões digitais normalizadas de medicamentos chineses que sejam holísticas, características e robustas. Trata-se de uma disciplina que se baseia em técnicas analíticas modernas para obter impressões digitais padronizadas holísticas, características e robustas de MTC. A tarefa consiste em otimizar os métodos de processamento e deteção de amostras, selecionar picos de referência razoáveis e identificar e atribuir picos de impressões digitais. Esta disciplina permite o estabelecimento de métodos para a extração e separação dos componentes activos da medicina tradicional chinesa e a confirmação estrutural exacta, que é um passo importante no processo de impressão digital para completar a identificação clara dos picos e constitui uma base importante para o estudo espetroscópico da impressão digital. Entre eles, a cromatografia líquida de alta resolução (HPLC) é reconhecida como o principal método de deteção de perfis de impressões digitais de medicamentos chineses. A combinação de HPLC-MS e GC-MS tornou-se um método credível e importante para a identificação qualitativa de picos de impressões digitais. Os métodos analíticos utilizados pela maioria dos investigadores atualmente incluem principalmente: cromatografia líquida de alta resolução (HPLC), cromatografia gasosa (GC) e cromatografia-espetrometria de massa [4,5]. 1.2.1 Cromatografia líquida de alta resolução (HPLC) A HPLC é a classe mais utilizada atualmente, com as vantagens de uma elevada eficiência de separação e de uma análise rápida, especialmente para ervas individuais com diferenças subtis na composição e preparações compostas com uma composição mais complexa. Por exemplo, Deng Shuhong et al [6] estabeleceram impressões digitais por HPLC do extrato de Astragalus e correlacionaram-nas com o efeito anti-fadiga. Sun Dongmei et al [7] utilizaram HPLC para determinar o teor de hesperidina em ervas de Chenpi de diferentes origens, e os resultados mostraram que havia diferenças no teor de hesperidina em ervas de Chenpi de diferentes origens.1.2.2 Cromatografia gasosa (GC) A cromatografia gasosa tem as características de alta eficiência, alta sensibilidade, baixa dosagem de amostra e análise rápida, e é utilizada principalmente para a identificação de componentes voláteis da medicina tradicional chinesa[8] . Por exemplo, Ruan Jian et al[9] utilizaram a CG para determinar a impressão digital do óleo volátil de Angelica sinensis e estabeleceram os picos de impressão digital comuns do óleo volátil de Angelica sinensis para fornecer uma base para a avaliação da qualidade das ervas de Angelica. 1.2.3 Cromatografia-espetrometria de massa A cromatografia-espetrometria de massa é um método que combina a cromatografia e a espetrometria de massa num instrumento analítico completo através de uma interface adequada e efectua a análise de materiais com a ajuda da tecnologia informática. O espetro de massa pode ser considerado como o detetor da cromatografia. No estudo da relação espectroscópica, a cromatografia-espetrometria de massa é principalmente utilizada para a identificação dos componentes correspondentes aos picos cromatográficos das impressões digitais, incluindo a cromatografia gasosa-espetrometria de massa (GC-MS) e a cromatografia líquida de alta resolução-espetrometria de massa (HPLC-MS). Por exemplo, Zhang Jinyu et al [10] utilizaram a GC-MS para analisar a composição química do óleo volátil da angélica das nuvens de diferentes origens e estabelecer a sua impressão digital, e os resultados mostraram que foram identificados 54 compostos na angélica das nuvens de Heching Machang, Dali, e 55 compostos na angélica das nuvens de Dapo Township, Zanyi, com os componentes químicos identificados a representarem 99,21% e 99,17% das áreas de pico do óleo volátil, respetivamente. Shen Lan et al [11], no processo de estudo da relação espetro-efectiva entre os componentes de efeito do composto de alcaçuz Paeonia lactiflora, correlacionaram a informação farmacodinâmica da experiência antiespasmódica da tira do músculo fúndico gástrico do soro de rato que contém o fármaco com a informação da impressão digital HPLC do soro de alcaçuz Paeonia lactiflora, e utilizaram HPLC-ESI-MS/MS para identificar os quatro picos com elevada correlação com o efeito farmacodinâmico por espetrometria de massa. Atualmente, as principais aplicações das relações espetro-efectivas da MTC são a avaliação da qualidade de ervas isoladas e a base material da eficácia das receitas compostas de MTC. A ideia fundamental é estabelecer perfis de impressões digitais, realizar experiências farmacodinâmicas e, em seguida, associar os dois através de software matemático e tecnologia informática, ou seja, associar “espetro” e “efeito” para estabelecer um sistema de avaliação da qualidade mais razoável e abrangente, em conformidade com o sistema teórico da MTC. 2.1 Investigação sobre a base material das ervas aromatizadas As ervas aromatizadas são seleccionadas de acordo com diferentes objectivos de investigação, incluindo diferenças de origem, variedade, local de extração e métodos de preparação, etc., para estabelecer perfis de impressões digitais e experiências farmacodinâmicas, e aplicar determinados métodos de análise científica para analisar as inter-relações entre os componentes químicos relevantes e os efeitos medicinais das ervas. Por exemplo, Liu Xu et al[12] estabeleceram o perfil de impressões digitais em fase líquida do extrato de Panax notoginseng através de um modelo de isquemia do miocárdio em ratos e descobriram que o ginsenosídeo Rg1, o ginsenosídeo Rb1 e a saponina R1 do Panax notoginseng eram os principais componentes eficazes do Panax notoginseng no tratamento da isquemia do miocárdio. Liu Xiaohua et al[13] utilizaram 10 lotes de extractos de partes de acetato de etilo da erva Astragalus de diferentes origens como estudo para investigar as suas relações espetro-efeito utilizando a análise de correlação cinzenta e descobriram que o efeito diurético do Astragalus estava associado aos flavonóides moderadamente polares que continha. Zhu Shita et al[14] utilizaram os extractos aquosos de diferentes misturas de Astragalus membranaceus para estabelecer as suas impressões digitais por HPLC e o efeito hemostático foi investigado pelo método de corte da ponta da cauda em ratos. Os resultados mostraram que os efeitos hemostáticos de diferentes misturas de P. palmata estavam associados aos efeitos combinados dos seguintes componentes químicos, incluindo o ácido gálico, o ácido ruibarbo, a ruibarbina, o ruibarbol e o éter metílico da ruibarbina. Guo Yansheng et al[15] investigaram a base material do efeito de eliminação de radicais livres de diferentes misturas de Angelica sinensis. Os perfis de impressões digitais de Angelica sinensis, óleo de Angelica, terra de Angelica e carvão de Angelica foram estabelecidos e foram identificados 11 picos comuns. A relação entre os componentes químicos e a eliminação de radicais livres nos perfis de impressões digitais de diferentes misturas de Angelica sinensis foi analisada por regressão linear múltipla. Os resultados mostraram que a ftalida de Z-butenilo estava positivamente correlacionada com a eliminação de radicais livres; o ácido ferúlico e a K-lactona de butilo estavam positivamente correlacionados com a eliminação de radicais hidroxilo, e a lactona H do rizoma de chuanxiong e a levistolida A estavam também estreitamente correlacionadas com a eliminação de radicais de oxigénio. Pode ver-se que a ftalida de Z-butenilo, o ácido ferúlico, a K-lactona de butilo, a lactona H do rizoma de chuanxiong e o levistolide A são as bases materiais para a eliminação de radicais livres nas misturas de Angelica. 2.2 Investigação sobre as bases materiais das receitas compostas chinesas Existem muitas ervas nas receitas compostas chinesas e a sua composição é mais complexa, pelo que, atualmente, a maioria das receitas originais é utilizada para as desmontar para investigação. As principais ideias e métodos utilizados para desmontar receitas são a investigação de uma única erva, a desnatação de medicamentos, a investigação de grupo, a investigação de grupo com base em partes activas ou ingredientes e a aplicação de princípios matemáticos para orientar a investigação de receitas desmontadas [16]. Os métodos de investigação baseiam-se, na sua maioria, em receitas compostas preparadas por diferentes fabricantes, diferentes combinações de ingredientes ou diferentes métodos de extração, e são realizados estudos de impressões digitais, juntamente com estudos farmacodinâmicos, em que os dados são processados por vários métodos de análise estatística para estabelecer as relações espetro-efectivas correspondentes e, em seguida, determinar os principais ingredientes activos ou substâncias potentes nas receitas compostas [17]. Por exemplo, Li You et al[18] utilizaram a cromatografia HPLC para estabelecer a impressão digital da parte triclorometânica da preparação de Panax notoginseng, e correlacionaram a relação normalizada da área do pico dos picos partilhados da impressão digital HPLC com o parâmetro de atividade anti-endotoxina IC50. Dou Zhihua et al[19] efectuaram a impressão digital no soro de ratos que continham as preparações negativas e mono-saborizadas do composto Wu Ren Nol cápsula e realizaram uma análise da relação espetro-efeito do composto Wu Ren Nol cápsula examinando o efeito sobre a proliferação de hepatócitos danificados induzidos e a fuga de alanina aminotransferase. Os resultados mostraram que não havia diferença significativa na eficácia do efeito protetor dos hepatócitos entre a Schisandra chinensis monogâmica e as preparações negativas de Panax quinquefolium, Chaihu e Haizhuzhu e o grupo que continha soro da fórmula completa, e havia uma boa correlação entre os efeitos de espetro, e a base material do efeito hepatoprotector provinha dos componentes semelhantes a lignanas contidos na Schisandra chinensis monogâmica. Li Peng et al[20] utilizaram o hexestrol em combinação com a contractina para causar dismenorreia no modelo de ratinho, e examinaram o Tao Hong Si Wu Tang e o seu sítio de éter de petróleo mono-herbáceo, combinando-os com o método GC-MS para os analisar, e utilizaram estatísticas matemáticas para correlacionar os dados farmacológicos com as áreas relativas dos picos da cromatografia gasosa, e o sítio de éter de petróleo teve efeitos reguladores e analgésicos menstruais significativos. Combinando a análise de regressão e de correlação, o estudo mostrou que o pico 23, ou seja, o ácido linoleico, desempenhou um papel importante no prolongamento da latência da torção e na redução do número de torções, seguido dos picos 24 (ácido octadecenóico), 45 (ácido araquidónico) e 61 (eicosanóide), que tiveram algum efeito sinérgico no efeito analgésico, para analisar e avaliar objetivamente a relação entre as substâncias químicas e o efeito. Lin Li et al[21] utilizaram o Diabai San como objeto de estudo, combinação ortogonal de cada fármaco na fórmula, determinação do espetro HPLC e avaliação dos efeitos expetorante e anti-inflamatório, e atribuição de picos do espetro HPLC, utilizando métodos estatísticos matemáticos para correlacionar dados farmacológicos e a área de cada pico cromatográfico no espetro HPLC para estudar a correlação dos efeitos espectrais, e verificaram que dois picos da casca de amoreira apresentavam uma correlação positiva com o efeito expetorante e o efeito anti-inflamatório, e que os picos da casca de amoreira apresentavam uma correlação positiva com o efeito expetorante e o efeito anti-inflamatório. Os resultados mostraram que dois picos da Morinda citrifolia apresentaram uma correlação positiva com os efeitos expetorante e anti-inflamatório. Verificou-se que dois picos da casca de amoreira apresentaram uma correlação positiva com o efeito expetorante e o efeito anti-inflamatório, que foram provisoriamente inferidos como sendo glicosídeos de estilbeno. Huang Yong et al[22] utilizaram a cromatografia em coluna para classificar o extrato de Lanjian Fine Sin em três fracções polares e utilizaram um método ortogonal para combinar as fracções e investigar a relação espetro-efeito entre cada fração e o efeito protetor das células de neuroblastoma (SH-SY5Y). Os resultados mostraram que as fracções B e C da impressão digital eram significativamente activas; os picos 4, 7-12 mostraram uma correlação positiva com a atividade. 3. Baseia-se no estudo da impressão digital da medicina chinesa e é uma direção de investigação científica que é mais profunda do que a impressão digital. No entanto, a ciência ainda se encontra numa fase preliminar, podendo ainda existir os seguintes problemas: 1) o estabelecimento de algumas impressões digitais da medicina chinesa pode ainda ter problemas de estabilidade e de separação deficiente; 2) muitos modelos farmacológicos ocidentalizados não reflectem bem a eficácia clínica da medicina chinesa, mas a escolha de modelos farmacológicos próximos da teoria da medicina chinesa não favorece o desenvolvimento da medicina chinesa no mundo, não existindo uma norma unificada para a eficácia e os indicadores quantitativos. Por conseguinte, a investigação mais rigorosa sobre a relação espetro-efeito da medicina chinesa ainda tem de ser explorada e melhorada na prática.