Atualmente, a tríade de eritrocitose verdadeira (PV), trombocitemia essencial (TE) e mielofibrose primária (PMF) é conhecida como neoplasias mieloproliferativas (NMP) negativas para o cromossoma Filadélfia. A descoberta da mutação do gene JAK2V617F, há uma década, pode ser considerada um marco no diagnóstico molecular das NMP, tendo também facilitado a investigação fundamental sobre a genética e a biologia das NMP, a reclassificação da doença, bem como o desenvolvimento de novos agentes terapêuticos e aplicações clínicas. I. Mutação do gene JAK2 V617F A investigação confirmou que esta mutação genética existe em 95% dos doentes com PV e em 50%-60% dos doentes com ET e PMF; outros tumores mielóides, como a leucemia mieloide aguda (LMA) e a SMD, podem também apresentar mutações de baixa frequência, especialmente a anemia granulocítica férrica em anel com trombocitose (RARS-T). Este marcador molecular tornou-se uma base de diagnóstico importante para PV, ET e PMF na classificação da OMS. Nos casos que não cumprem os critérios de diagnóstico da OMS, a presença da mutação JAK2 V617F sugere um risco potencial de NMP ou uma forma subclínica inerte de NMP. Verificou-se que existem dois tipos de mutações JAK2 V617F, puras e heterozigóticas. A ET é quase sempre heterozigótica, enquanto 28% dos doentes com PV e 14% dos doentes com PMF são puros. A carga do alelo JAK2 V617F está associada de forma diferente a diferentes fenótipos de NMP e tem significado prognóstico: os doentes com PV com uma carga elevada da mutação JAK2V617F têm maior probabilidade de desenvolver mielofibrose e trombose, aumento da contagem de glóbulos brancos e dos níveis de hemoglobina, redução da contagem de plaquetas e esplenomegalia; nos doentes com ET, o nível de JAK2V617F correlaciona-se positivamente com a contagem de glóbulos brancos e negativamente com a contagem de plaquetas. Em segundo lugar, a mutação do exão 12 do gene JAK2V617F está presente em cerca de 97% dos casos de PV. A mutação do exão 12 do gene JAK2 deve ser testada em alguns casos mutação-negativos, nos quais existe uma hiperplasia eritroide acentuada e níveis diminuídos de eritropoietina (EPO), sem hiperplasia de megacariócitos ou granulócitos. Estudos demonstraram que as mutações do exão 12 do gene JAK2 podem ser substituições, deleções, inserções ou duplicações do gene. Clinicamente, os doentes com mutações do exão 12 do gene JAK2 são mais jovens, cerca de 40% dos doentes têm menos de 50 anos de idade, e tendem a apresentar hiperplasia da linhagem eritroide pura (níveis mais elevados de hemoglobina e volume de células sanguíneas), embora uma pequena percentagem de doentes apresente hiperplasia da linhagem tripla. Uma vez que as mutações do exão 12 do JAK2 tendem a ser expressas em níveis baixos, é particularmente importante escolher um ensaio adequado e altamente sensível. Mutação do exão 10 do gene MPL Um ano após a descoberta da mutação JAK2V617F, foram encontradas mutações do oncogene viral da leucemia mieloproliferativa (MPL) em doentes com ET e PMF que eram negativos para a mutação, mas não em doentes com PV. O gene MPL, localizado no cromossoma 1p34, codifica o recetor da trombopoietina e afecta a proliferação e diferenciação dos megacariócitos. As mutações adquiridas no códão W515 activam constitutivamente o recetor da trombopoietina através da ativação por citocinas da via JAK-STAT a jusante. As duas mutações mais comuns são a W515L e a W515K, que estão presentes em 15% dos doentes com NMP JAK2 V617F-negativas, dos quais 5% dos doentes com ET e mais de 10% dos doentes com PMF podem ter esta mutação. Além disso, as mutações do MPL podem ocorrer em conjunto com as mutações JAK2 V617F. As mutações do exão 10 da MPL estão frequentemente agrupadas em torno do aminoácido 515 na região transmembranar. As mutações reprodutíveis que causam a doença incluem tipicamente as mutações W515L e W515K, bem como as raras mutações W515A, W515R e W515S. O fenótipo clínico dos doentes com mutações no exão 10 da MPL é frequentemente o de níveis de hemoglobina relativamente baixos. Em comparação com os doentes com ET positiva para a mutação JAK2V617F, os doentes com ET com a mutação MPL apresentavam contagens de plaquetas mais elevadas, megacariocitose marcada e níveis séricos de EPO mais elevados. A mutação W515K apresentava uma carga de mutação alélica mais elevada do que os doentes com a mutação W515L, sugerindo que os mecanismos das duas variantes podem ser diferentes. O rastreio de mutações MPL é fortemente recomendado em doentes com suspeita de ET ou PMF sem mutações JAK2 e CALR. IV.Mutações no exão 9 do gene CALR O gene CALR codifica a calreticulina, uma chaperona molecular de ligação ao cálcio associada ao retículo endoplasmático. As mutações CALR associadas à NMP são inserções, deleções ou ambas no exon 9 e são geralmente mutações heterozigóticas. Verificou-se que as mutações CALR estão presentes em 60% a 80% dos doentes com mutações JAK2 e MPL negativas para ET e MPF, e ocasionalmente em doentes com MDS-RARS-T, raramente em doentes com PV, e raramente em simultâneo com mutações JAK2V617F ou BCR-ABL. Uma análise retrospetiva de ET e PMF revelou que os doentes com mutações CALR apresentavam contagens de plaquetas mais elevadas, níveis baixos de hemoglobina e uma sobrevivência global mais elevada do que os doentes com mutações JAK2, mutações MPL ou triplos negativos. Relativamente aos doentes JAK2-negativos, os doentes com ET com mutações CALR tiveram menos eventos trombóticos e cardiovasculares e uma maior incidência de mielofibrose, e os doentes com PMF CALR-positiva tiveram uma menor incidência de dependência de transfusão de eritrócitos e uma maior sobrevivência. monitorização da doença.