As doenças alérgicas são respostas imunitárias patológicas que ocorrem quando o organismo é intolerante a uma variedade de substâncias, e a incidência destas doenças tem tendido a aumentar anualmente em todo o mundo nos últimos 20-30 anos, com um aumento de 5% no número de crianças com asma alérgica por ano no Reino Unido. O âmbito da doença envolve a dermatologia, a otorrinolaringologia, a medicina respiratória, a gastroenterologia e a pediatria, e apresenta vários graus de risco para a saúde humana e, em casos graves, pode mesmo levar a situações de risco de vida. Foram identificados mais de 300 antigénios que causam doenças alérgicas [1], e a identificação dos alergénios é a chave para o diagnóstico das doenças alérgicas, para a imunoterapia específica e para a prevenção de novas exposições aos alergénios. Atualmente, existe uma grande variedade de métodos de deteção de alergénios e de reagentes na China, o que faz com que os resultados dos testes tenham uma grande diferença e traz alguma confusão ao diagnóstico clínico e ao tratamento. No entanto, este artigo centra-se nos métodos de deteção de alergénios, na análise dos resultados, nos problemas e nas orientações para o tratamento a rever, para que o trabalho de normalização clínica sirva de referência. 1, teste in vivo As doenças alérgicas são reacções alérgicas de início rápido do tipo I mediadas por IgE, e a deteção de alergénios pode ser in vivo e in vitro. O teste in vivo pode mostrar a reação da pele e das mucosas causada pela degranulação dos mastócitos. As soluções de deteção de alergénios e as soluções para testes cutâneos mais utilizadas na China são: a solução purificada fornecida pelo laboratório do Departamento de Reacções Metabólicas do Peking Union Medical College Hospital e os reagentes normalizados fornecidos pela AllergoPharma da Alemanha e pela ALK da Dinamarca. Os diferentes produtos têm o mesmo princípio, o método de operação é mais ou menos o mesmo e os resultados são avaliados de forma semelhante, mas os resultados obtidos não são os mesmos devido às diferentes concentrações de alergénios que contêm. 1.1 Teste cutâneo (teste cutâneo) 1.1.1 Métodos e resultados Teste cutâneo (skin prick test, SPT) utilizando como exemplo a solução de punção padronizada da empresa alemã AllergoPharma. Métodos: A solução de picada do alergénio foi gotejada na pele da palma da mão do antebraço e a agulha de picada foi inserida verticalmente na pele através da gota da solução de teste na pele, e os resultados do teste foram lidos após 10-20 minutos, com solução salina de fenol a 0,4% como controlo negativo e solução de histamina a 0,1% contendo fenol a 0,4% como controlo positivo. Os resultados foram avaliados da seguinte forma: o aparecimento de dermátomos amarelados com eritema à sua volta constitui uma reação positiva. Se o dermátomo for maior do que a histamina, é ++++, se o dermátomo for igual à histamina, é ++++, se o dermátomo for menor do que a histamina, é ++ ou ++, e se o dermátomo for igual ao da solução salina, é negativo. O teste intradérmico (IT) foi efectuado com uma solução de teste cutâneo normalizada da AllergoPharma, Alemanha. Métodos: 0,01 ～ 0,05 ml de solução de teste cutâneo foi injetado na pele da parte externa do braço ou das costas, e o resultado do teste foi lido após 10 ～ 20 minutos. Controlo, solução de teste cutâneo de alergénio para fornecer unidades e resultados de julgamento como acima. 1.1.2 Aplicação clínica O teste cutâneo tem sido aplicado ao trabalho clínico há mais de 100 anos e pode ser usado para o diagnóstico de rinite alérgica, eczema, asma alérgica e outras doenças alérgicas e imunoterapia específica antes, com alta especificidade, baixa taxa de falsos positivos, simples, preciso e econômico. O teste cutâneo por picada é recomendado pela Associação Europeia de Alergia e Imunologia Clínica (EAACI) como o melhor método de diagnóstico in vivo, devido à sua segurança, facilidade de utilização, elevada sensibilidade, boa relevância clínica, menos dor, menos efeitos secundários e adequação a crianças e pessoas altamente sensíveis [2]. Contra-indicações: pessoas com antecedentes de choque anafilático com o teste cutâneo da penicilina; doenças que afectam significativamente o estado sistémico; doenças com lesões cutâneas no local do teste; doentes a receber β-bloqueadores ou inibidores da ECA; doentes com alergia à adrenalina; gravidez; e pessoas com menos de 5 anos de idade. Contra-indicações relativas: tomar anti-histamínicos num intervalo de 3 meias-vidas do medicamento; tentar efetuar o diagnóstico quando menos sintomático, se possível. Complicações: erupção cutânea localizada, necrose cutânea; efeitos secundários sistémicos graves muito raros, como anafilaxia, edema da laringe. Antes do início do teste, deve ser feita uma história clínica detalhada e o teste deve ser realizado num hospital experiente e equipado com meios e equipamento de reanimação. 1.2 O teste de provocação específica (teste de provocação específica) é um teste que simula as condições naturais de morbilidade e utiliza uma pequena quantidade de alergénios para provocar um ataque alérgico ligeiro para determinar os alergénios. De acordo com as diferentes partes da patogénese do doente, podem ser realizados diferentes testes de provocação de órgãos. 1.2.1 Métodos e resultados do teste de provocação brônquica: medir o volume expiratório de força do primeiro segundo (VEF-1) e a capacidade pulmonar antes do teste, inalar o líquido de controlo ou o líquido antigénico e verificar novamente o VEF-1 15-20 min após a inalação Os critérios para determinar um resultado positivo são os seguintes: (1) autoconsciência óbvia dos sintomas, como sensação de urgência no peito e chiado, (2) os pulmões podem ouvir o som estrondoso, (3) uma diminuição no VEF-1 de mais de 20%. 20% ou mais. O teste de excitação da mucosa nasal pode ser realizado pelo método de inalação de antigénio (pó) ou pelo método da gota (líquido), o edema e a palidez da mucosa aparecem após 15-20 minutos de exposição ao antigénio e o doente apresenta sintomas como prurido nasal, corrimento nasal, espirros, etc., que podem ser considerados como uma reação positiva. O teste de excitação conjuntival será uma concentração adequada de gota de alergénio na conjuntiva de um lado do doente, o outro lado da gota de soro fisiológico como controlo; 15 ~ 20min para observar os resultados. A congestão conjuntival, o edema, o aumento da secreção, a comichão e até a vermelhidão das pálpebras no lado do teste são considerados reacções positivas. 1.2.2 Aplicação clínica: as indicações para o teste de excitação são os doentes que são altamente suspeitos de terem doenças alérgicas, mas o teste cutâneo e o teste in vitro são negativos; os doentes que são alérgicos a múltiplos alergénios e estão à procura dos alergénios responsáveis; e os doentes com asma alérgica para conhecer a sua tolerância antes da imunoterapia. Os doentes com alergia alimentar são o padrão de ouro para o diagnóstico. O teste de provocação é mais específico do que o teste cutâneo e correlaciona-se melhor com a história do doente, os sintomas e o teste de adsorção de alergénios. Este teste tem o perigo potencial de causar ataques de asma aguda grave ou choque anafilático e outras complicações graves, a concentração de antigénio utilizada não deve ser demasiado elevada, deve ser aumentada de pequena para grande; o teste deve ser preparado para uma série de ressuscitação antes do teste. 1.3 Teste de adesivo atópico (APT) 1.3.1 Métodos e resultados Tomemos como exemplo o aparelho de teste e o teste de adesivo dos alergénios padrão europeus da Swedish Chemical Diagnostics AB. A quantidade adequada de alergénio foi colocada na pequena câmara do dispositivo de teste de adesivos e, no caso dos alergénios líquidos, foi primeiro colocado um pedaço de papel de filtro no dispositivo de teste de adesivos e, em seguida, foram adicionadas gotas de alergénio. A fita de teste de adesivo com os alergénios adicionados foi aplicada na pele das costas do doente, abaixo da omoplata, sem lesões, e etiquetada, e o doente foi instruído para proibir actividades extenuantes durante 3 dias, tendo o teste de adesivo sido removido e observado após 48 horas, e depois observado novamente às 72 horas para determinar os resultados [3]. Os critérios de interpretação foram baseados nos critérios recomendados pelo International Contact Dermatitis Research Group[4] . 1.3.2 Aplicação clínica Clinicamente, é utilizado principalmente para diagnosticar a dermatite de contacto, sendo fácil de utilizar e apresentando resultados precisos. A sensibilidade do teste de adesivo é de 97,8%, a especificidade é de 76,9%, a exatidão é de 90,3%, o valor preditivo positivo é de 88,2% e o valor preditivo negativo é de 95,2%. Contra-indicações relativas: pessoas com lesões cutâneas extensas. Os efeitos secundários são ligeiros, tendo sido registados erupção cutânea e prurido[3]. 2, teste in vitro O teste in vitro é um ensaio imunoquímico, geralmente detecta sIgE no soro. As indicações são: (1) lesões cutâneas extensas, não pode ser teste cutâneo; (2) história de reação alérgica grave induzida por antigénio, o teste in vivo tem um certo grau de risco; (3) tomar anti-histamínicos após a inibição da reação cutânea, os resultados do teste cutâneo são imprecisos; (4) o antigénio não pode ser usado como teste cutâneo, como produtos químicos, etc. [2]; (5) resultados do teste cutâneo com os resultados clínicos clínicos do antigénio e do teste cutâneo [2]; (5) os resultados do teste cutâneo com os resultados clínicos do teste cutâneo. ) Os resultados dos testes cutâneos são inconsistentes com a história clínica e precisam de ser mais analisados e verificados; (6) Os alergénios responsáveis são claramente identificados antes da imunoterapia específica. O teste in vitro é seguro, sem efeitos secundários e contra-indicações. A nível nacional, surgiu uma variedade de sistemas de deteção, que se baseiam nos diferentes princípios descritos. 2.1 Teste de adsorção de alergénios radioactivos (RAST) 2.1.1 Princípio de deteção e resultados O sistema Uni-CAP produzido pela Pharmacia (Suécia) é o mais representativo e o seu princípio básico consiste em adsorver os alergénios num novo tipo de sólido denominado immune CAP, que é um polímero transportador hidrofílico numa pequena cápsula. O princípio básico é a adsorção de alergénios num novo tipo de sólido denominado immune CAP, que é um polímero transportador hidrofílico numa pequena cápsula, sintetizado a partir de derivados de celulose activada, com uma capacidade de ligação muito elevada aos alergénios. Cada CAP transportador de fase sólida é encapsulado com um alergénio diferente, que se liga especificamente ao alergénio se este estiver presente no soro do doente, e depois é adicionado soro de coelho anti-IgE humano marcado com enzima (ELISA) para formar um complexo transportador de fase sólida-alergénio-IgE-ELISA. Após a lavagem e a adição da matriz, adiciona-se finalmente a solução de desenvolvimento, emitindo fluorescência, de acordo com a conversão da absorvância de fluorescência do teor de IgE, a absorvância de fluorescência do soro a testar é superior à do produto de referência é positiva, inferior à do produto de referência é negativa, os principais procedimentos operacionais são automaticamente concluídos pelo instrumento e este imprime automaticamente os resultados [5]. Os resultados foram quantificados de acordo com a norma 75P502 desenvolvida pela OMS para a deteção de sIgE, e os resultados foram determinados da seguinte forma: <0,35KUPL é classe 0; 0,35-0,7KUPL é classe 1; 0,7-3,5KUPL é classe 2; 3,5-17,5KUPL é classe 3; 17,5-50,0KUPL é classe 4; 50,0-100,0KUPL é classe 5; >100,0KUPL é classe 5. >100.0KUPL é classe 6 [2]. 2.1.2 Características do sistema: o sistema CAP tem excelentes condições de reação e uma distância de difusão curta, e os seus resultados têm uma sensibilidade e especificidade elevadas, com um valor esperado positivo superior a 95%. A taxa de conformidade entre o teste cutâneo de alergénios e os resultados do CAP é elevada, atingindo 86,2% a 96,6%; a correlação entre os dois é boa, com coeficientes de correlação entre 0,661 e 0,957 [5]. Um alergénio, um tampão de reação, escolha clínica, pode ser mais ou menos, qualquer combinação, para evitar desperdícios desnecessários. A quantidade de sangue colhida é pequena e menos dolorosa. 2.2 Ensaio imunoenzimático (ELISA) 2.2.1 Princípio de deteção e resultados: Tomando como exemplo o kit de deteção in vitro de alergénios da empresa American ASI, o seu princípio básico é o seguinte: quando o portador com o antigénio alérgico solidificado na superfície e o soro do doente são cultivados em conjunto, a IgE específica no soro liga-se especificamente ao antigénio, e o anticorpo especificamente ligado ao antigénio pode ser reconhecido pelo anticorpo secundário associado à enzima e, após a adição do cromogénio, a enzima associada ao anticorpo secundário torna o tampão de reação reativo. A enzima à qual o anticorpo secundário está ligado altera a cor do revelador de laranja para azul. A profundidade do desenvolvimento da cor é diretamente proporcional à IgE específica no soro; pode detetar qualitativamente/semi-quantitativamente a concentração de IgE específica no soro. Determinação do resultado: de acordo com a diferença no desenvolvimento da cor, pode ser identificado em 5 graus (0-4). 2.3 Método de imunotransferência 2.3.1 Princípio de deteção e resultados: Tomemos como exemplo o sistema de deteção de alergénios AlleryScreen fabricado pela MEDIWISS, Alemanha. Os alergénios específicos são adsorvidos na superfície da membrana de nitrocelulose, incubados com a adição de soro do doente, e a IgE específica na amostra reage com os alergénios e liga-se à membrana de nitrocelulose. É adicionada estreptavidina marcada com fosfatase alcalina, que se liga à biotina. Após incubação com a adição de substrato ativado por enzima BCIP/NBT, ocorre uma reação cromogénica enzimática específica do substrato e surge um precipitado na tira de reagente. A tonalidade da cor é proporcional ao teor de anticorpos sIgE no soro. Após a secagem da tira reagente, esta é detectada por um monitor de alergénios especial e o resultado do teste quantitativo é lido. 2.3.2 Características do sistema: enquanto outros métodos ligam covalentemente os alergénios à fase sólida, os alergénios concentrados neste sistema não estão modificados e estão ligados a uma membrana de nitrocelulose, e a utilização de um sistema de amplificação por afinidade com biotina permite a deteção de quantidades vestigiais de IgE. O sistema AlleryScreen tem uma sensibilidade excelente, semelhante à do sistema CAP, mas ligeiramente inferior à do teste cutâneo. O sistema AlleryScreen tem uma sensibilidade excelente, semelhante à do sistema CAP, mas ligeiramente inferior à do teste cutâneo. Pode detetar até 20 antigénios numa amostra e requer apenas 250 μl de soro, o que pode ser utilizado como um teste de rastreio clínico. Seleção e diagnóstico de testes clínicos de alergénios O diagnóstico de alergénios de doenças alérgicas é um processo abrangente, incluindo uma história clínica clara (história de alergia por inalação de alergénios, alergia de contacto e alergia alimentar), teste cutâneo, teste de excitação específico e deteção de IgE específica no soro, etc. O teste cutâneo por picada é preferível por ser simples, económico e seguro. Quando o teste cutâneo é consistente com a história clínica, o diagnóstico pode ser efectuado. Os resultados dos testes cutâneos devem ser analisados em conjunto com a história clínica; um teste cutâneo positivo, consistente com a história clínica, sugere que o alergénio é o sensibilizador da doença; pelo contrário, uma história clínica negativa e um teste cutâneo negativo sugerem basicamente que o alergénio não está relacionado com a doença [2]. Os testes cutâneos para diagnosticar a sensibilização a múltiplos alergénios devem ser realizados com IgE sérica e testes de provocação para identificar o alergénio responsável. Se o teste cutâneo não for consistente com a história clínica, devem ser efectuados mais testes séricos de IgE e de provocação para uma análise abrangente. Os testes séricos de IgE específica podem ser utilizados como contraindicação aos testes cutâneos, em doentes cujos testes cutâneos não correspondem à história clínica e em doentes cujos testes cutâneos diagnosticam sensibilização a múltiplos alergénios. Em doentes com sensibilidades a múltiplos alergénios, um alergénio com uma classificação elevada no teste cutâneo e na IgE específica do soro pode ser considerado o alergénio responsável. Os testes de provocação normalizados são o método de diagnóstico específico mais fiável, especialmente em doentes com alergia alimentar, uma vez que os testes de provocação alimentar aleatórios em dupla ocultação são o padrão de ouro para o diagnóstico da alergia alimentar devido à fraca precisão dos resultados dos testes cutâneos e da IgE específica para os alergénios alimentares. O teste de excitação não pode ser utilizado como um teste clínico de rotina devido ao seu potencial para induzir reacções alérgicas graves. Quando o teste cutâneo e a IgE específica sérica são negativos e existe uma história clínica clara de exposição a alergénios e de alergia, é necessário confirmar o diagnóstico; quando foi diagnosticada alergia a uma variedade de alergénios, não é possível identificar o alergénio responsável; os doentes com asma alérgica em imunoterapia específica, para avaliar a tolerância ao tratamento, podem realizar o teste de excitação. O teste de provocação deve ser efectuado apenas quando muito necessário, com o consentimento informado do doente, com medidas de salvamento e capacidade de salvar o doente, e com tratamento atempado dos efeitos secundários. Não é aconselhável efetuar testes de provocação durante uma exacerbação. Em conclusão, o diagnóstico de alergénios requer uma avaliação completa e correcta por um médico experiente, com base na história e no exame.