>br />Assaios Os métodos de detecção de antigénios e anticorpos virais nos fluidos corporais de doentes infectados com VIH são fáceis de executar e fáceis de aplicar universalmente, sendo a análise de anticorpos particularmente comum. Contudo, o estado e a importância dos ensaios do antigénio P24 e do gene viral do VIH na detecção da infecção pelo VIH também está a receber cada vez mais atenção.
>Antibody testing HIV antibody in serum é um indicador indirecto da infecção pelo VIH. De acordo com o seu principal âmbito de aplicação, os métodos de teste de anticorpos do HIV existentes podem ser divididos em testes de despistagem e testes de confirmação.
Reagentes de confirmação O teste de confirmação mais comummente utilizado para soros positivos dos testes de despistagem é o Western blot (WB), que só é adequado como teste de confirmação devido ao seu período de janela relativamente longo, sensibilidade ligeiramente fraca, e custo elevado. O outro teste de rastreio aprovado pela FDA é o ensaio de imunofluorescência (IFA), que é menos caro do que o WB e relativamente simples de realizar, com todo o processo concluído em 1-1,5 horas. A principal desvantagem deste método é que requer um detector de fluorescência dispendioso e profissionais experientes para observar e julgar os resultados, e os resultados não podem ser armazenados durante muito tempo. A FDA recomenda agora um IFA negativo ou positivo ao divulgar os resultados finais a dadores de sangue cujo WB não pode ser determinado, mas não como critério de elegibilidade do sangue.
>Teste de rastreio O teste de rastreio é utilizado principalmente para rastrear dadores de sangue, pelo que requer fácil operação, baixo custo, e sensível e específico. 2012, o principal método de rastreio do mundo continua a ser o ELISA, existem alguns poucos reagentes de aglutinação de partículas e reagentes rápidos ELISA. O ELISA tem alta sensibilidade e especificidade, operação simples, só necessita de laboratório equipado com marcador enzimático e lavador de placas pode ser. É particularmente adequado para utilização em grande escala de rastreio em laboratórios.
Teste de aglutinação de partículas é outra operação simples e conveniente, método de detecção de baixo custo, os resultados do método podem ser determinados a olho nu, alta sensibilidade, especialmente adequado para países em desenvolvimento ou um grande número de dadores de sangue de rastreio, a desvantagem é que devem ser utilizadas amostras frescas, a especificidade é fraca.
O ensaio a olho nu (ensaio Dot-blot) desenvolvido no final dos anos 80 é um método rápido ELISA (Rapid ELISA), que é extremamente fácil de operar, o processo é curto, a maior parte do processo pode ser concluído em 5-10 minutos ou mesmo 3 minutos, mas o método é muito mais caro do que o ELISA e os reagentes de aglutinação de partículas.
>br />Human immunodeficiency immunodeficiency virus antibody oral mucosal exudate test kit (método de ouro coloidal) pertence à categoria de imunocromatografia lateral (imunoensaio de ouro), que é um reagente de diagnóstico rápido baseado na tecnologia imunocromatográfica que pode ser usado para detectar anticorpos HIV-1 e HIV-2 em amostras de exsudado de mucosa oral por operação manual, lendo os resultados a olho nu, e resultados qualitativos em 20 minutos. Pode ser utilizado para testes de aconselhamento voluntário, colheita relutante de sangue, e rastreio primário de doentes com tonturas das agulhas. O método é adequado para testes de despistagem primária, e qualquer pessoa que seja considerada positiva por este reagente precisa de ser submetida a mais testes para confirmação.
HIV negativo] significa que os anticorpos HIV não são detectados a partir do corpo humano, e o símbolo negativo é indicado por (-). Depende de quando o teste foi feito. Durante o período de janela, o corpo da pessoa infectada ainda não produziu anticorpos VIH, ou ainda não produziu uma quantidade suficiente de anticorpos VIH, quando o teste VIH é negativo, se o teste for feito após o período de janela, a possibilidade de infecção pelo VIH pode ser excluída.
[VIH positivo] indica que os anticorpos VIH são detectados a partir do corpo humano, e o símbolo positivo é indicado por (+).
Factores dos resultados indeterminados do teste A infecção ainda está no período de janela: o período desde a entrada do VIH no corpo até ao teste não é suficientemente longo, pelo que o soro ainda não formou uma resposta típica de anticorpos A SIDA progride para a fase final, o nível de anticorpos diminui a reacção cruzada de outros anticorpos proteicos não virais: doenças auto-imunes, certas doenças malignas, gravidez, transfusão de sangue ou transplante de órgãos, etc, o organismo pode produzir alguns anticorpos cuja reacção é semelhante à A reacção causada pelos anticorpos da proteína do núcleo P24 do HIV é muito semelhante.
Detecção de antigénios A detecção de patogenes refere-se principalmente à detecção directa de vírus ou genes de vírus de espécimes hospedeiros através do isolamento e cultura viral, observação morfológica microscópica electrónica, detecção de antigénios virais e ensaio genético. Porque os dois primeiros métodos são difíceis e requerem equipamento especial e técnicos especializados. Portanto, apenas a detecção de antigénio e RT-PCR (transcrição inversa-PCR) pode ser utilizada para o diagnóstico clínico. A detecção do antigénio HIV-1P24 pode ser utilizada como um auxílio no diagnóstico da incerteza ou período de janela dos anticorpos HIV-1; um auxílio no diagnóstico diferencial precoce de bebés nascidos de mães seropositivas com anticorpos HIV-1; um teste de reagente ELISA positivo de antigénio/anticorpo HIV-1 da quarta geração, mas o teste de antigénio P24 é geralmente realizado com reagentes duplos de anticorpos ELISA, que devem ser aprovados e registados pela SDA, e o resultado positivo deve ser confirmado pelo teste de neutralização de acordo com as instruções do reagente. O teste de antigénio HIV-1 P24 negativo significa apenas que não há reacção neste teste, e não pode excluir a infecção pelo VIH, pelo que geralmente não é usado como um item de diagnóstico de rotina na prática clínica.
>br />HIV teste de ácido nucleico pode ser usado para ajudar no diagnóstico da infecção pelo VIH, monitorizar o curso da doença, orientar o plano de tratamento e determinar a eficácia, e prever a progressão da doença. Os métodos de teste de carga viral do VIH comummente utilizados incluem ensaios PCR de transcrição inversa (RT-PCR), ensaios de amplificação de sequência de ácido nucleico (NASBA), ensaios de hibridação de DNA ramificado (bDNA), e técnicas de PCR quantitativa fluorescente em tempo real. Vale a pena notar que cada sistema de quantificação de RNA VIH tem o seu limite mínimo de detecção, ou seja, o menor número de cópias ou unidade internacional que pode ser medido. Um teste de ácido nucleico HIV positivo pode ser usado como indicador auxiliar para o diagnóstico da infecção pelo HIV e não pode ser usado apenas para o diagnóstico da infecção pelo HIV. Ao comunicar os resultados quantitativos do teste de ácido nucleico do HIV, os resultados devem ser comunicados de acordo com as leituras do instrumento, indicando o método experimental utilizado, tipo e volume da amostra, e quando o resultado da medição for inferior ao limite mínimo de detecção, o nível limite mínimo de detecção deve ser indicado.
Teste qualitativo do ácido nucleico do HIV também pode ser utilizado como um auxílio no diagnóstico da infecção pelo HIV e na investigação básica, como a análise de subtipos e variantes genéticas do HIV. As técnicas de PCR ou RT-PCR são geralmente utilizadas, utilizando reagentes de amplificação comuns aos laboratórios de biologia molecular. Os primários podem ser derivados da literatura ou concebidos pelo doente, e devem tentar cobrir todas as estirpes ou estirpes comuns, ou pode ser utilizada uma combinação de primários. As condições de reacção e as sequências de iniciadores utilizadas devem ser indicadas ao relatar os resultados do ensaio qualitativo. Além disso, tirando partido da alta sensibilidade dos métodos de detecção de ácidos nucleicos, a utilização de ensaios de amplificação de ácidos nucleicos combinados e métodos para testes de ácidos nucleicos combinados de amostras de populações com elevada suspeita de infecção e anticorpos negativos permite a detecção atempada de infecções em fase de janela. Este método é mais rentável que o teste de ácido nucleico de amostra única.
Métodos de cultura O método comum é a co-cultura, na qual células nucleadas únicas são isoladas do sangue periférico humano normal, estimuladas e cultivadas com PHA, e depois adicionadas às células nucleadas únicas do doente para diagnóstico e estudos da SIDA.
Após os linfócitos periféricos ou da medula óssea do próprio paciente serem estimulados com PHA durante 48-72 horas e cultivados in vitro (IL2 é adicionado ao meio de cultura) durante 1 a 2 semanas, a proliferação do vírus pode ser libertada para o espaço extracelular e as células fundem-se em células gigantes multinucleadas, que eventualmente se decompõem e morrem. As células também podem ser isoladas e passadas usando linhas linfocitárias passadas, como as células HT-H9 e Molt-4.
A gama de infecção por VIH em animais é estreita, apenas chimpanzés e gibões, e geralmente os chimpanzés são utilizados para experiências. A infecção de chimpanzés com células VIH ou filtrado de VIH sem células, ou a transfusão de sangue de chimpanzés infectados com VIH para chimpanzés normais foi bem sucedida, e o VIH foi consistentemente isolado em sangue e fluido linfático durante 8 meses, e os anticorpos específicos do VIH foram detectados após 3-5 semanas e continuaram a ser mantidos a um certo nível. No entanto, nenhuma doença ocorreu em chimpanzés ou gibões após a infecção.