A tecnologia de microarranjo genético é uma nova técnica de biologia molecular que marca uma época, desenvolvida em meados dos anos 90, que integra tecnologias relacionadas com a biologia molecular, imunologia, biofísica, bioquímica, microeletrónica, informática, estatística e muitas outras disciplinas. Comparada com outras técnicas de análise de perfis de expressão genética, tais como o RNA blotting, determinação de sequências de biblioteca de cDNA e sequências de expressão genética, tem vantagens óbvias na medida em que pode analisar milhares de genes simultaneamente e em paralelo numa experiência, e tem também as características de alta velocidade, alta integração e baixa contaminação. 1, princípio de detecção e classificação da tecnologia do chip genético O chip genético é também conhecido como chip de ADN ou cDNA microarray (cDNA-microarry). O princípio básico é a hibridação complementar de sondas e genes alvo, o que significa que uma certa quantidade de fragmentos de ácido nucleico (cDNA, EST ou oligonucleótidos) são utilizados como sondas e fixados por um robot a alta velocidade numa alta densidade e de acordo com uma disposição pré-estabelecida de localização regular num suporte, tais como lâminas, bolachas de silício, diafragmas de nylon e superfícies biossintéticas orgânicas para fazer microarrays de ADN, que são utilizados para detectar a presença de sequências complementares na amostra a ser testada. Os microarrays de ADN são utilizados para detectar a presença de sequências complementares na amostra a ser testada. O mRNA é extraído da amostra e o cDNA rotulado fluorescentemente é obtido através de uma reacção de transcrição inversa. O microarrays de ADN contendo milhares de genes é depois hibridizado ao microarrays de ADN e os fragmentos na lâmina que não são complementares entre si são lavados. Para comparar as diferenças na expressão genética entre duas linhas celulares diferentes ou fontes de tecido diferentes, o mRNA é extraído de duas linhas celulares diferentes ou fontes de tecido diferentes. As reacções de transcrição inversa são rotuladas com cores diferentes de fluorescência, misturadas em quantidades iguais e depois hibridizadas a um microarray de ADN contendo milhares de genes, e as lâminas são digitalizadas a laser confocal. Os níveis relativos de expressão de cada gene em diferentes linhas celulares são deduzidos comparando a intensidade das duas fluorescências em cada matriz de pontos. A tecnologia de microarranjos genéticos consiste em quatro etapas principais: preparação de microarranjos, preparação de amostras, reacção de hibridação e detecção de sinais e análise de resultados. Há muitas formas de classificar os microarrays genéticos, que podem ser divididos em duas categorias principais em termos de fabricação: o método de síntese in situ e o método de micro-matriz ou amostra de ponto sintético. A síntese in situ é a aplicação da tecnologia de foto-impressão em semicondutores à química de síntese do ADN, onde os oligonucleótidos são sintetizados na superfície de um substrato sólido para produzir conjuntos de dezenas de milhares de oligonucleótidos diferentes numa área de alguns centímetros quadrados, com cada fragmento de oligonucleótido representando um gene específico presente num local específico no chip de ADN. E existem dois tipos de chips de cDNA e chips de oligonucleótidos de acordo com o comprimento da sonda manchada no vector [2]. 2, a aplicação de chips de gene em ginecologia Com a implementação do Projecto Genoma Humano e a chegada da era pós-genoma, as ciências da vida têm vindo gradualmente a ganhar atenção. O desenvolvimento profundo da biologia molecular fez com que os cientistas se apercebessem da importância da regulação genética no fenómeno da vida. O estudo das doenças a nível genético é a única forma de encontrar a causa raiz das doenças e também ajuda na prevenção e tratamento de doenças. Os chips genéticos têm mostrado uma vasta gama de aplicações com a sua análise rápida, de alto rendimento, simultânea e precisa de milhares de informações genéticas. No campo da medicina, os chips genéticos têm sido amplamente utilizados no estudo da etiologia das doenças, diagnóstico de doenças, tratamento de doenças, farmácia genética, rastreio de novos medicamentos e outras investigações. 2.1 Aplicação de microarrays genéticos em tumores ginecológicos Nos últimos anos, a utilização de microarrays genéticos na investigação de tumores tornou-se um ponto de acesso, que pode analisar a expressão genética de várias centenas de amostras de tumores simultaneamente num único microarray [3]. Fornece uma ferramenta poderosa para estudar a expressão anormal de genes relevantes durante a ocorrência e desenvolvimento de tumores, bem como o diagnóstico e tratamento de tumores. Tem sido aplicado no estudo e tratamento de muitos tumores em ginecologia. 2.1.1 Microarrays genéticos e cancro dos ovários O cancro do ovário é um dos três principais tumores da genitália feminina e tem um mau prognóstico, uma vez que é normalmente encontrado numa fase avançada quando os sintomas são atípicos. Apesar das melhorias contínuas no tratamento clínico, o prognóstico do cancro dos ovários não pode ser significativamente melhorado. Por conseguinte, a detecção precoce, o diagnóstico precoce e o tratamento eficaz são as chaves para melhorar o prognóstico do cancro dos ovários. Acredita-se actualmente que o cancro dos ovários é causado principalmente por alterações intracelulares numa série de genes genéticos, tais como p53, c-erbβ-2, c-myc, a família k-ras e RHOGDI2, mas as alterações e supressões nestes genes ainda não explicam a diversidade dos tipos de tecidos cancerígenos dos ovários, tais como se são plasmacitoma, carcinoma mucinoso, carcinoma de tipo celular claro ou carcinoma endometrióide, e também Também não explica o comportamento biológico do cancro dos ovários, como a metástase e a sensibilidade à quimioterapia. Portanto, uma abordagem molecular e multifacetada do estudo das alterações genéticas pode levar a avanços significativos no diagnóstico precoce, tratamento precoce e melhor prognóstico do cancro dos ovários. A carcinogénese ovariana é o resultado de alterações poligénicas e progressivas nas células epiteliais precursoras da superfície ovariana. Arnold et al. utilizaram um microarray de cDNA contendo 588 genes para estudar a expressão genética no cancro dos ovários e descobriram que, em comparação com a linha de células epiteliais imortalizadas da superfície ovariana HOSE17.1, as linhas de células cancerosas dos ovários OAW42, PEO1 e JAM tinham a molécula de muco intercelular 1 ( A expressão ICAM-1) foi significativamente reduzida. Tanto o mRNA como a expressão proteica do ICAM-1 foram reduzidos na maioria das linhas de células cancerosas dos ovários e tumores primários em comparação com o epitélio ovariano normal. A osteopontinina é uma fosfoglicoproteína de ligação ácida ao cálcio presente nos fluidos do corpo humano e é um mediador da resposta inflamatória e da formação de tumores. A osteopontinina foi rastreada por Kim et al. em 99 casos de cancros de ovários invasivos e juncionais de vários tipos de cordão umbilical por microarranjo genético e os resultados mostraram que a sensibilidade da osteopontin na previsão precoce e avançada do cancro dos ovários A sensibilidade da osteopontino na previsão de cancro dos ovários precoce e avançado foi de 80% e 85%, respectivamente. Embora sejam necessários estudos prospectivos para determinar a sensibilidade e especificidade dos testes pré-operatórios dos níveis de osteopontino e prostasina nos soros dos doentes, estudos preliminares sugerem que os testes de microarranjo genético dos níveis de osteopontino e expressão da prostasina podem ser úteis no diagnóstico precoce do cancro dos ovários. Tapper et al. aplicaram microarrays de cDNA contendo 588 genes para analisar a expressão genética durante a progressão do cancro plasmático dos ovários e mostraram que a diferença mais marcante no adenocarcinoma em comparação com o adenoma benigno foi que o RHOGDI2 (Rho GDP-dissociation inhabitor 2) foi upregulado independentemente da fase do tumor. Sawiris et al. construíram um microarray cDNA especializado contendo 516 genes para estudar o cancro dos ovários e chamaram a este pequeno microarray especializado Ovachip. Este pequeno microarray tem muitas vantagens. Utilizaram Ovachip para identificar muitos genes expressos de forma diferente no cancro dos ovários e encontraram dois grandes grupos de genes, o grupo IGF2, que é regulado para cima, e o grupo CAK, que é regulado para baixo. O grupo IGF inclui principalmente o factor de crescimento semelhante à insulina (IGF-2), supressor de pontos de controlo (CHES1), proteína associada à resistência cisplatina (CRA), quinase dependente da ciclina celular (CDK6 ), TGF-β2, etc. A expressão de IGF2 pode estar associada à regulação dos pontos de controlo do ciclo celular e à aquisição de resistência aos medicamentos. o grupo CAK inclui principalmente CDK7 e a sua subunidade reguladora citocina H, receptor AXL tirosina quinase (AXL), proteína de ligação ao cálcio S100 A2 (S100A2), e proteína de ligação ao selénio 1 (SELENBP1). A identificação e detecção de alterações nos perfis de expressão genética do cancro dos ovários ajuda não só no diagnóstico precoce e genotipagem e prognóstico patológico, mas também no rastreio clínico e quimioterápico de medicamentos. Os microarrays genéticos como ferramenta analítica integrada de alta densidade fornecem muita informação valiosa na terapia do cancro dos ovários e no rastreio quimioterápico de medicamentos. O problema da insensibilidade à quimioterapia no cancro dos ovários é frequentemente encontrado na prática clínica, principalmente devido a diferenças genéticas, tais como genes de resposta aos medicamentos, que resultam em respostas diferentes aos medicamentos. Ou o desenvolvimento de genes de resistência aos fármacos que levam à insensibilidade aos fármacos. As principais moléculas proteicas associadas à resistência aos medicamentos nas células tumorais são a classe P-glycoprotein, dihidrofolate reductase (DHFR), glutathione-S-transferase (GST), ciclina, adenylate synthase e os produtos oncogene c-erbβ-2, ras e c-myc. Se a presença de genes relevantes ou genes de resistência aos medicamentos for detectada pela tecnologia de microarranjo antes da quimioterapia, a escolha do medicamento e do tratamento pode ser feita para evitar o efeito do tratamento devido à insensibilidade aos medicamentos. Huang et al. efectuaram o perfil genético de vários tecidos tumorais por microarranjo e descobriram que os tecidos ovarianos apresentavam uma expressão significativamente elevada de factor de ligação não-preparado, um factor de transcrição específico da RNA polimerase І, que juntamente com o factor de transcrição SLI constituiu um catalisador do gene RNA ribossómico. Outras observações clínicas mostraram que o nível de expressão do XIST estava significativamente correlacionado com a sensibilidade ao paclitaxel (TAX), e portanto o XIST podia ser usado como um potencial preditor da sensibilidade à quimioterapia do TAX no cancro dos ovários. Para clarificar o desenvolvimento da resistência do TAX, Lamendola et al. utilizaram diferentes concentrações de TAX nas linhas de sub-células ovarianas SKOV-3. A análise do microarray de cDNA combinada com o mapeamento de autocélulas (SOM) revelou que a expressão da transcrição da resistência a múltiplas drogas 1 não foi elevada no SKOV-3 (0,003TR) em comparação com o SKOV-3 parental, enquanto que foi elevada no SKOV-3 (0,03TR) e SKOV-3 ( A análise SOM poderia clarificar as alterações dos genes transcripcionais relacionados, incluindo o crescimento e manutenção das células, estrutura celular, transdução de sinal, resposta inflamatória e outras famílias de genes. O cDNA microarray combinado com a sua própria análise de mapeamento tecidual poderia, portanto, clarificar o processo de desenvolvimento da resistência ao TAX, e espera-se que seja um método eficaz para o rastreio de famílias de genes seleccionadas após fenótipos precoces de resistência aos medicamentos. Para compreender a complexa rede de canais apoptóticos induzidos por TAX e o mecanismo de resistência aos fármacos, Sugimura et al. examinaram linhas de células de cancro dos ovários (KF) tratadas com TAX e carboplatina (CBDCA) e outras linhas de células resistentes a TAX (KFTX) através da tecnologia de cDNA microarray e mostraram que o TAX upregulou a expressão de Caspases-1, -2, -3, 4, -6, -9, -10 em KF e a expressão de Caspases-9, -10 em KFTX. 10 expressão, mas nenhuma alteração ou desregulamentação no KFTX, enquanto que o bag-1 e hsc70 foram significativamente subregulamentados e nem o p53 nem o bcl-2 foram subregulamentados. Sugere-se, portanto, que os canais mitocondriais independentes do p53 e os canais induzidos por uma melhor resposta desempenham um papel crítico na apoptose induzida pelo TAX nas linhas celulares do cancro dos ovários e que a inibição destes canais e a subida de regulação da expressão bag-1 e hsc70 poderiam levar a Resistência aos fármacos fiscais. Zhang Wenjing et al. aplicaram a tecnologia de microarranjo genético para investigar as diferenças nos perfis de expressão genética entre a linha celular resistente ao paclitaxel do cancro dos ovários humanos OC3/Tax300 e a sua linha celular sensível OC3, e para rastrear genes relacionados com a resistência aos fármacos. Entre eles, 217 genes foram desregulados e 17 genes foram desregulados; os genes desregulados foram principalmente a proteína nuclear codificada com EBV (EBNA-3) e a proteína de sinalização (COP9), e os genes desregulados foram principalmente a tirosina quinase (JAK2), as proteínas de choque térmico (HSPs), a nicotinamida nicotinamídica reduzida (NADH ), etc. Isto pode proporcionar uma nova forma de explorar melhor o mecanismo de resistência aos medicamentos nas células tumorais do cancro dos ovários. 2.1.2 Lascas de genes e cancro do colo do útero O cancro do colo do útero é um tumor maligno comum nas mulheres. Tal como outros tumores malignos, a sua ocorrência e desenvolvimento é o resultado de alterações estruturais e funcionais anormais de múltiplos genes dentro e fora da célula. Estudos anteriores foram frequentemente limitados a um ou poucos genes e não conseguiram fornecer uma compreensão mais abrangente de todo o processo do cancro. Os chips genéticos, com o seu grande rendimento e detecção simultânea, podem satisfazer este requisito. Liu Kaijiang et al. utilizaram microarrays de expressão de cDNA contendo 2048 genes humanos completos para analisar os perfis de expressão genética de três casos de cancro do colo do útero em mulheres Uyghur clinicamente ressecadas e três casos de cancro do colo do útero em mulheres Han e as suas próprias amostras normais de tecido cervical, e ambos identificaram genes específicos que foram regulados em baixa e em alta na expressão. Contribuindo para o diagnóstico precoce, é agora claro que a infecção por HPV é necessária para o desenvolvimento do cancro do colo do útero. O novo sistema Bethesda recomenda a utilização de testes de HPV como coadjuvante dos tradicionais esfregaços de Papanicolaou. Cho et al. utilizaram um microarray de ADN HPV recentemente concebido para testar os genótipos HPV e compararam os resultados com os resultados do Papanicolau de acordo com o novo sistema Bethesda. O microarranjo continha 22 sondas específicas de oligonucleótidos, 15 das quais eram de alto risco e 7 de baixo risco. O microarranjo de DNA HPV foi combinado com o diagnóstico de Papanicolau num estudo comparativo de 685 esfregaços cervicovaginais. Os resultados mostraram que a taxa de positividade do HPV foi de 31,9% em 414 controlos, enquanto que a taxa de positividade foi de 78,6% em 271 casos de cancro. As principais causas do cancro cervical são os subtipos 16, 18 e 58 do HPV, e as lesões intra-epiteliais escamosas de baixo grau são um tipo de lesão causada por co-infecção com múltiplos subtipos do HPV e são mais comuns em mulheres jovens (40 anos).Oh et al. estabeleceram um microarranjo de ADN HPV contendo 15 tipos de alto risco e 12 de baixo risco, aplicando três linhas celulares HPV-positivas (células Hela, Caski e SiHa O microarray foi avaliado utilizando três linhas de células HPV-positivas (células Hela, Caski e SiHa) e duas linhas de células HPV-negativas (células C33A e A549) e mostrou que o microarray foi capaz de detectar os tipos conhecidos de HPV presentes nestas linhas de células com limites de detecção mais de 100 vezes superiores aos do método PCR, e que o microarray era altamente específico e reprodutível. Também se tentou testar o HPV como uma alternativa ao rastreio citológico, e estudos demonstraram que a captura de hibridação bem como os microarrays HPV são viáveis como ferramenta de rastreio, e a sua sensibilidade não difere da da citologia em meio líquido. Assim, os microarrays de ADN HPV podem ser utilizados como uma poderosa ferramenta de rastreio em inquéritos epidemiológicos em larga escala para a detecção precoce da infecção por HPV de alto risco e tratamento direccionado, reduzindo significativamente a incidência de cancro do colo do útero. Peng Min et al. utilizaram a tecnologia de microarrays de genes para analisar amostras primárias de cancro do colo do útero a fim de investigar a variação na expressão de oncogenes no genoma do cancro do colo do útero, e como resultado, um total de 11 proto-oncogenes ou genes supressores com expressão diferencial foram rastreados no tecido de amostras primárias de cancro do colo do útero, representando 3,4% dos genes candidatos. Isto pode fornecer uma base e pistas para o estudo da patogénese do cancro do colo do útero. Fujimoto et al [21] utilizaram microarrays contendo 1700 genes relacionados com o cancro para analisar células SKG-IIIa e SKG-IIIb de duas morfologias diferentes do mesmo doente com cancro do colo do útero, com o objectivo de detectar genes específicos do tipo de tecido relacionado com cancro e 10 genes rastreados (IGFB3, IAP Os 10 genes (IGFB3, IAP, TM1CEA, EPLG8, IFIG, CAD13, SNO, AMLEV1, TGFB2 e PLP) foram confirmados por RT-PCR semi-quantitativo em 9 linhas de células cancerosas do colo do útero. SNO e TGFβ2 foram expressas tanto em linhas de células escamosas como adenocarcinoma e podem estar associadas à carcinogénese cervical. A forma de diagnóstico da TBS para o cancro do colo do útero foi estabelecida na maioria das regiões, e não existe melhor método para o tratamento de doentes relatados com células epiteliais escamosas atípicas. Alguns autores [22] aplicaram microarrays e confirmaram por immunoblotting que, em comparação com o epitélio cervical normal negativo do HPV, as amostras de cancro do colo do útero com infecção por HPV de alto risco tinham ERBB2, KIT, FLT1, MYCN, RAS, CDKN2A CCND1, NME1, NME2, MET, FGF7, FGFR2, STAT1 e anti-apoptótico (por exemplo Bcl-2), os genes relacionados com a citoarquitectura foram upregulados, enquanto alguns membros das famílias de receptores TGF e integrina, IL-1 e proteína de ligação ao factor de crescimento semelhante à insulina foram desregulamentados. É portanto viável obter células cervicais através da escovagem celular e analisar as características da expressão genética por matrizes de expressão genética, a fim de distinguir claramente os tumores malignos do epitélio escamoso cervical normal. 2.1.3 Microarranjo genético e cancro endometrial Kabbarah et al [23] utilizaram RNA de 800-4400 células obtidas por microisolamento de amostras uterinas fixadas em álcool e incluídas em parafina para perfil de expressão do microarranjo genético. Os resultados identificaram um número de genes aberrantes conhecidos e genes aberrantes desconhecidos no carcinoma endometrial, e confirmaram que o Amd1, que está aumentado noutros tumores, foi também aumentado no carcinoma endometrial do rato RNAs, tornando o microarray útil para o diagnóstico de lesões microscópicas precoces no carcinoma endometrial. Usando a tecnologia de microarranjo de genes contendo 4096 clones de cDNA, Zhou Huaijun et al. compararam os perfis de expressão genética de dois tecidos de adenocarcinoma endometrial e os seus correspondentes tecidos normais para explorar genes candidatos ao adenocarcinoma endometrial, e os resultados mostraram que os dois espécimes coexpressavam um total de 350 genes expressos de forma diferente, dos quais 33 foram significativamente aumentados pela Razão>3 e 44 foram significativamente diminuídos pela Razão<0,3. 44 genes. Isto sugere que a formação de adenocarcinoma endotelial é o resultado de transformação maligna das células devido a anomalias em múltiplas vias de transdução causadas por múltiplas anomalias nos genes. Os genes diferentemente expressos em 32 casos de tecidos de cancro endometrial foram analisados por tecnologia de microarranjo genético e os seus perfis de expressão genética foram analisados por agrupamento hierárquico. Como resultado, foram analisados 12 genes diferentemente expressos associados a metástases tumorais. Os resultados da análise hierárquica de agrupamento de 32 casos de cancro endometrial com base nestes 12 genes expressos diferencialmente mostraram uma taxa de concordância de 66% com a fase patológica cirúrgica. 2.1.4 Chips de genes e choriocarcinoma O coriocarcinoma é um tumor altamente maligno que pode metástase em todo o corpo através da corrente sanguínea numa fase precoce, destruindo tecidos e órgãos. Os avanços na tecnologia de monitorização do HCG e da quimioterapia melhoraram o prognóstico dos pacientes com coriocarcinoma. Os perfis de expressão genética diferiram entre as linhas celulares normais do trofoblasto humano e do chorocarcinoma e foram comparados por Vegh et al [26] utilizando um microarray de cDNA contendo 588 genes conhecidos. Seis genes foram upregulados e três genes foram desregulados em células de coriocarcinoma em comparação com células de trofoblasto normal, incluindo a proteína de choque térmico 27 (HSP227), que é desregulada no coriocarcinoma e contribui para o aumento da sensibilidade dos tumores de trofoblasto à quimioterapia. 2.2 Aplicação de chips genéticos na endometriose e na síndrome dos ovários policísticos A endometriose (EM) é uma das doenças ginecológicas mais comuns, afectando cerca de 10% das mulheres em idade reprodutiva. Embora muita investigação tenha sido realizada sobre esta doença, a sua verdadeira etiologia é ainda desconhecida e o tratamento é limitado à cirurgia e a alguns fármacos hormonais, e é susceptível de recorrência. A tecnologia de microarranjo genético fornece uma ferramenta eficaz para atingir o objectivo da investigação devido ao seu baixo consumo, alta sensibilidade e alto rendimento para analisar os perfis de expressão genética intracelular. Li Jie et al. aplicaram um microarranjo genético de 578 pontos de cDNA de perfis de expressão relacionados com a imunidade humana para analisar os genes relacionados com a endometriose. Os resultados foram obtidos para nove genes associados à endometriose, mostrando dois genes com regulação ascendente e sete genes com regulação descendente. A diferença mais significativa entre os genes down-regulated foi a IL-12R, que foi mais sensível e eficiente do que os resultados ELSA. Fan Yang et al. aplicaram um microarray de genes contendo 1200 genes, rotulados com sondas isotópicas, para investigar o perfil de expressão dos genes CK associados a tecidos EM e tecidos uterinos normais. Os resultados mostraram que 119 genes expressos de forma diferente foram identificados em três tecidos EM e três tecidos endometriais normais, incluindo 15 genes CK e CKR up-regulated, incluindo IL21, IL22, IL26, L28, VEGFR, TGF, EGF, FGF e EPOR. O microarranjo de expressão de genes pode analisar eficazmente os genes CK e CKR relacionados com EM, fornecendo uma ferramenta eficiente e precisa para a compreensão dos mecanismos da doença. A prevalência da síndrome do ovário policístico (PCOS) é também relativamente elevada, e estudos anteriores sugeriram um agrupamento familiar de PCOS, mas o mecanismo genético exacto permanece pouco claro. A aplicação da tecnologia de microarranjo genético tem ajudado no estudo desta doença. Utilizando a microarranjo do genoma humano U133A, Hu Zhenxing et al. utilizaram células de granulosa folicular deixadas após a transferência in vitro de fertilização-embrião em pacientes com síndrome do ovário policístico e controlos para detectar genes relevantes expressos diferentemente nas células de granulosa de cinco pacientes com PCOS e cinco controlos, e os resultados mostraram que um total de 46 genes expressos diferentemente significativamente associados à PCOS foram rastreados em comparação com os controlos, dos quais 25 Os resultados mostraram que um total de 46 genes expressos diferentemente foram significativamente associados ao PCOS em comparação com o grupo de controlo, dos quais 25 foram aumentados e 21 diminuíram. Estes genes expressos de forma diferente têm várias funções biológicas, tais como regulação do metabolismo lipídico, sinalização intercelular e resposta inflamatória imunitária, reflectindo a diversidade de sintomas clínicos em doentes com PCOS. A tecnologia de microarranjo genético pode ser utilizada para rastrear novos genes candidatos geneticamente relevantes para a PCOS. 2.3 Aplicações de chips de genes em outros campos ginecológicos Além do cancro dos ovários, cancro do colo do útero e cancro endometrial, os chips de genes também têm sido utilizados em outras áreas da ginecologia. Os resultados mostraram que o ácido carbónico desidratase III foi altamente expresso nos tecidos mamários de ratos "virgens" e grávidas, e também nos tecidos mamários de ratos com genes associados ao fraco desenvolvimento epitelial mamário removidos, enquanto os genes que codificam as proteínas do leite foram preferencialmente expressos nos tecidos mamários de ratos lactantes. Isto é útil para a compreensão dos mecanismos moleculares da lactação. Yoshioka et al. utilizaram a tecnologia de microarranjos genéticos para examinar a expressão de genes no útero de ratos antes e depois da gravidez, e analisaram 6500 genes em microarrays genéticos. Isto sugere que a activação e inactivação de certos genes são necessárias para uma implantação bem sucedida. Estudos semelhantes demonstraram que alguns genes podem estar envolvidos em diferentes fases da invasão do trofoblasto, tais como proteínas integrais, MMPs e proteínas de matriz extracelular, e reguladores autocrinos e parácrinos, tais como factores de crescimento e citocinas que regulam a proliferação e diferenciação do trofoblasto celular in vitro. A informação expressa por estes genes pode explicar a implantação do ovo grávido e a formação da placenta, e pode também explicar algumas gravidezes patológicas, como a pré-eclâmpsia, fornecendo assim novas ideias para assegurar um bom resultado de gravidez. Para investigar a expressão diferencial dos genes nos defeitos do tubo neural congénito embrionário induzidos pela diabetes gestacional e para revelar o mecanismo molecular do desenvolvimento dos defeitos do tubo neural congénito embrionário, dois grupos de ratos SD com idades compreendidas entre 70-90 dias foram utilizados para construir um modelo de rato de defeitos do tubo neural congénito embrionário induzidos pela diabetes gestacional. Os genes expressos de forma diferente foram detectados por microarranjo do gene cDNA. Foi identificado um total de 79 genes expressos de forma diferenciada, incluindo 42 genes de regulação ascendente (incluindo genes relacionados com apoptose como BAX, bcl22, HSP70 e glucose2transporter 3) e 37 genes de regulação descendente (incluindo fosfolipase A2 e receptor de factor de crescimento II tipo insulina2 3). A expressão diferencial dos genes induzidos pela diabetes mellitus gestacional em embriões com defeitos do tubo neural congénito foi revelada, fornecendo uma base experimental para o diagnóstico e tratamento precoce eficaz dos defeitos do tubo neural congénito. Dezasseis sondas de oligonucleótidos de aproximadamente 30 bp de comprimento foram concebidas com base nas sequências de citomegalovírus (HCMV169), vírus do herpes simplex (HSV-I,II), vírus da rubéola (RV) e Toxoplasma gondii (TOX) obtidas a partir do Genbank utilizando o primer de ADN e o software de concepção de sondas DNAClub e Primer 510, e depois sintetizadas utilizando um simples O ADN dos microrganismos patogénicos testados e o ADN do vector plasmídeo foram cortados e ligados com a mesma endonuclease para formar um ADN "híbrido". A amplificação por PCR e a rotulagem de corantes fluorescentes foram então realizadas utilizando os primers universais no vector para amplificar o produto. O produto foi hibridizado ao microarray de ADN e digitalizado utilizando o scanner de microarray GeneTACTMUC4 (Genomic Solutions Inc) e os dados foram processados e analisados utilizando o software fornecido GeneTAC IntegratorMicroarray Analysis Software Version3130. e análise. Os resultados mostraram que o chip genético preparado por este método podia detectar cinco microrganismos patogénicos simultaneamente, e os resultados das amostras positivas testadas por PCR quantitativa fluorescente eram geralmente consistentes com o chip genético. Embora a tecnologia de microarranjo genético não esteja disponível há muito tempo e ainda existam muitas limitações no campo da obstetrícia e ginecologia, mostrou uma aplicação muito ampla em obstetrícia e ginecologia. A tecnologia de microarranjo genético também pode ser utilizada para identificar genes geneticamente relacionados na fase embrionária inicial e para fornecer um diagnóstico pré-natal, fornecendo assim uma forte garantia para a eugenia da população. À medida que as pessoas se tornam mais conscientes dos vários genes, é possível compreender o desenvolvimento de várias doenças a partir do nível genético. Uma vez que os chips genéticos não foram desenvolvidos durante muito tempo, existem ainda deficiências nesta tecnologia [39], tais como a necessidade de equipamento dispendioso, a inevitável incorporação de nucleótidos errados e impurezas em sondas sintéticas, o que reduz a especificidade, e a necessidade de melhorar a densidade das matrizes de sondas. Com o desenvolvimento da tecnologia, estes problemas serão ultrapassados.