No diagnóstico e tratamento do cancro, os médicos confiam frequentemente em biópsias invasivas e imagens não invasivas para rastrear o tamanho do tumor, a sua expansão e a resposta ao tratamento. Esta abordagem pode ser não só traumática para o paciente, mas também dispendiosa. No entanto, o advento dos ensaios CirculatingTumorCells (CTCs) quebrou este impasse. As CTC são células tumorais que se destacaram de uma lesão tumoral e se disseminaram na corrente sanguínea, e são uma causa importante de recorrência pós-operatória e metástases distantes em doentes com tumores malignos, bem como uma contribuição significativa para a morte em doentes com tumores. Em comparação com outras amostras histológicas, tais como medula óssea, as amostras de sangue periférico são fáceis de obter e menos invasivas, tornando-as uma fonte mais ideal para testes clínicos de rotina. Nos últimos anos, os CTC surgiram como uma das mais promissoras ferramentas não invasivas de diagnóstico e monitorização da eficácia em tempo real para o diagnóstico e monitorização de tumores. Numerosas experiências demonstraram que os testes de CTC podem ajudar no diagnóstico precoce de tumores, determinar o prognóstico do doente, avaliar a eficácia dos medicamentos antitumorais e desenvolver planos de tratamento individualizados. A via técnica para o diagnóstico de tumores através de testes de CTCs é mais sensível do que os métodos tradicionais de diagnóstico na detecção de alterações da doença e não tem efeitos secundários sobre o doente. No entanto, é muito difícil detectar estes raros CTCs. Isto porque pode haver apenas 1-10 dessas células numa amostra de 1 ml de sangue de um doente, e este é produzido continuamente, tem uma distribuição dinâmica no sangue, está sujeito a desfasamento e é altamente heterogéneo. Dada a força absoluta demonstrada pela detecção de CTCs e a existência de alguns obstáculos, muitos cientistas de todo o mundo persistem na luta neste campo. Recentemente, o Professor Qihui Shi, especialista do Programa Jovens Mil Talentos da Escola de Engenharia Biomédica da Universidade Jiao Tong de Shangai, deu uma palestra sobre o tema “Detecção de tumores/ células epiteliais circulantes no sangue periférico humano” no Fórum de Shangai 2015 sobre Desenvolvimento e Cooperação na Grande Indústria da Saúde. Aplicações clínicas da detecção de CTC O sangue tem sido durante muito tempo uma boa janela para detectar a saúde humana. A abordagem tradicional da detecção de doenças tem sido a medição de marcadores de base molecular, incluindo proteínas, metabolitos, ácidos nucleicos, microRNAs, exosomas, etc. No entanto, para a detecção do cancro, na última década tem havido um interesse crescente na detecção de marcadores celulares (ou seja, células raras destacadas de tecidos de órgãos para o sangue), incluindo CTCs. Hoje em dia, a detecção de CTCs é um novo meio de detecção do cancro, mas uma pesquisa da literatura mais antiga revela que o conceito de CTCs foi introduzido já em 1869 pelo estudioso australiano Ashworth. No entanto, após quase 150 anos de desenvolvimento, o campo não fez grandes progressos, principalmente porque os CTC são muito raros. Por conseguinte, é uma tarefa muito difícil identificar e isolar os CTCs de sangue complexo. Entre outras coisas, o processo de isolamento precisa de alcançar uma elevada taxa de captura e pureza, e de assegurar a actividade das células. Além disso, como o número de CTCs é muito pequeno, pode envolver a integração de múltiplos ensaios numa única célula. Actualmente, a maioria dos estudos técnicos e clínicos estão limitados à contagem de CTC, e menos investigação tem sido feita sobre a caracterização molecular dos CTC. No entanto, os resultados da contagem podem flutuar à medida que a taxa de descargas de células cancerosas muda, e a heterogeneidade funcional de diferentes CTCs é tão grande que a informação obtida a partir da contagem de CTCs é de facto muito limitada. O único produto aprovado: o sistema CellSearch Actualmente, o único teste clínico aprovado pela FDA para os CTC é o CellSearch da JanssenDiagnostics, que define efectivamente os CTC de origem epitelial. ) captura de esferas magnéticas, coloração e contagem de células DAPI+/CK+/CD45- sob um microscópio fluorescente. A FDA dos EUA aprovou o sistema CellSearch em 2004, 2007 e 2008 para avaliação prognóstica, sobrevivência sem progressão e previsão de sobrevivência global em cancros metastáticos de mama, colorectal e da próstata, respectivamente. Em 2012, o CFDA aprovou o sistema CellSearch para a avaliação do prognóstico do cancro da mama metastásico. Entre eles, num artigo intitulado CirculatingTumorCells,DiseaseProgression,andSurvivalinMetastaticBreastCancer publicado no NEJM em 2004, os investigadores utilizaram o sistema CellSearch para o prognóstico do cancro da mama metastásico Os resultados mostraram que 7,5 ml de sangue com menos de 5 CTC tinham um melhor prognóstico. Partilha de dispositivos CTC, a análise mais forte dos princípios de detecção Segundo o Prof. Shih, existem 40-50 empresas envolvidas no desenvolvimento de dispositivos CTC a nível internacional, algumas das quais estão listadas na tabela abaixo. De acordo com a tecnologia de testes, os dispositivos CTC estão principalmente divididos em testes in vivo e in vitro. O primeiro envolve deixar o sistema de teste nos vasos sanguíneos do corpo; actualmente apenas o GILUPI na Alemanha o está a desenvolver, e é uma selecção positiva baseada em anticorpos EpCAM. Para além disto, todos os outros dispositivos CTC são testes in vitro, ou seja, testes realizados através do desenho de 7,5 ml de sangue. Existem dois tipos de ensaios in vitro, ensaios directos sem captura (enriquecimento) e captura (enriquecimento) seguidos de ensaios, sendo este último o método dominante. Há também dois tipos de ensaios pós-captura (enriquecimento), nomeadamente a selecção positiva e negativa. A selecção positiva baseia-se na captura de marcadores de superfície CTC ou nas propriedades físicas das células (tamanho, densidade); o primeiro baseia-se na tecnologia de esfera imunomagnética e na tecnologia de chip microfluídico, o segundo no princípio da filtração e centrifugação. A selecção negativa, por outro lado, captura CTC indirectamente por marcadores de superfície leucocitários. Comparação das características dos diferentes métodos de captura O método mais fiável para a identificação de células tumorais benignas/malignas circulantes é a sequenciação, mas é mais caro. Alternativamente, a identificação patológica é uma opção, mas actualmente não existem muitas provas clínicas fiáveis sobre se este método pode identificar de forma fiável as células livres no sangue. De facto, existem muitos outros tipos de células no sangue além de eritrócitos, leucócitos e CTC, incluindo megacariócitos maduros, células mielóides imaturas, bem como linfócitos, células endoteliais, células epiteliais escamosas, células mesoteliais e outras. A especificidade de qualquer método de triagem é limitada e estas células mistas podem ter um impacto nos testes subsequentes. Por conseguinte, cientistas e empresas relacionadas na China e no estrangeiro têm vindo a desenvolver novas técnicas para melhorar esta situação. Acredita-se que num futuro próximo, o CTC será mais amplamente utilizado no diagnóstico e tratamento clínico do cancro.