O método tónico é um tratamento comum para os tumores. Na clínica, debate-se se existem vantagens ou desvantagens no tratamento de tumores com este método de tratamento. A maioria dos académicos acredita que os fármacos tónicos podem inibir o crescimento do tumor, prolongar a sobrevivência dos doentes e melhorar a sua qualidade de vida [1]; enquanto alguns clínicos acreditam que os fármacos tónicos promovem o crescimento do tumor e não devem ser utilizados com mais frequência na prática clínica. A fim de explorar o efeito dos medicamentos tónicos nos tumores, escolhemos a fórmula representativa tónica Sijunzi Tang para observar o seu efeito na taxa de inibição do tumor e na indução da apoptose das células tumorais em ratinhos hormonais. 1. materiais e métodos 1.1 Animais experimentais 60 ratinhos da raça Kunming, com um peso de 20g±2g, metade machos e metade fêmeas, foram adquiridos ao Centro de Animais Experimentais da Primeira Universidade Médica Militar. Os ratinhos foram mantidos em gaiolas separadas, alimentados e abeberados livremente, e a sala dos ratinhos foi mantida ventilada. 1.2 Linha celular A linha celular era a estirpe de tumor de ascite SRS-82 de ratinho, a inoculação subcutânea pode gerar sarcoma. A linha celular é fornecida pelo Instituto de Investigação Farmacêutica da Universidade da China e é regularmente reanimada e cultivada. 1.3 Preparação dos medicamentos Os medicamentos utilizados nesta experiência foram adquiridos na farmácia do Hospital Nanfang e a injeção de 5-FU foi fabricada pela Jiangsu Nantong Pharmaceutical General Factory (Su Wei Pharmaceutical Quarantine No. 241201). A composição de Sijunzi Tang: ginseng 9g, Atractylodes macrocephala 9g, Poria 9g, Radix et Rhizoma Glycyrrhizae 6g. Preparação: decocção convencional de água duas vezes, a decocção resultante foi evaporada e concentrada por um banho de água a temperatura constante a 70 ℃, e a concentração final do líquido Sijunzi Tang foi obtida para ser 0,33g / ml (contendo drogas brutas), que foi mantido em um refrigerador a 4 ℃. A injeção de 5-FU foi diluída para 3mg / ml em solução salina estéril e armazenada em geladeira a 4 ℃. 1.4 Estabelecimento de modelo de camundongo com tumor carregado Cultura de ressuscitação in vitro de células SRS-82, coletar as células na fase de crescimento exponencial das células, centrifugar a 1000r / min, lavar duas vezes com PBS, centrifugar para remover o sobrenadante e diluir com solução salina estéril, ajustada para 2 ~ 3 × 106 / ml. 10 camundongos Kunming saudáveis foram selecionados aleatoriamente, e cada um foi injetado intraperitonealmente com 0,4 ml da suspensão celular mencionada acima, e foi dada atenção à observação da inoculação Após cerca de uma semana, o abdómen dos ratinhos inoculados estava obviamente distendido e saliente, tendo sido extraída a ascite, que era branca leitosa, e depois diluída com solução salina estéril a 1:2 num tubo de ensaio estéril, obtendo-se finalmente cerca de 15 ml de solução de diluição da ascite. A diluição da ascite acima referida foi utilizada para inocular 36 ratinhos Kunming, tendo cada um sido inoculado subcutaneamente com 0,2 ml da diluição no membro posterior direito. 1.5 Agrupamento experimental e administração de fármacos 36 ratos com modelação bem sucedida foram divididos aleatoriamente em 3 grupos de 12 ratos cada e numerados dentro dos grupos. Os 3 grupos foram: grupo de controlo em branco, grupo Sijunzi Tang e grupo 5-FU. Todos os tratamentos foram iniciados a partir do segundo dia após a modelagem, o grupo Sijunzi Tang foi gavageado com decocção preparada de Sijunzi Tang, 0,5 ml cada, uma vez por dia; o grupo de controlo em branco foi gavageado com uma quantidade igual de solução salina todos os dias; e o grupo 5-FU foi injetado intraperitonealmente com injeção diluída de 5-FU, 0,2 ml cada, dia sim, dia não. Após os tratamentos acima referidos terem sido efectuados continuamente durante 15 dias, os ratinhos foram mortos e os tumores foram retirados. 1.6 Pesagem do tumor e cálculo da taxa de inibição do tumor Os blocos de tumor foram retirados, pesados numa balança eletrónica e a taxa de inibição do tumor foi calculada de acordo com a fórmula convencional. 1.7 Observação da morfologia e estrutura das células tumorais por microscopia eletrónica de transmissão Foram retirados aleatoriamente dois ratos de cada grupo para observação por microscopia eletrónica. Após a remoção do tumor, foi cortado um volume de 0,5 mm3 de tecido tumoral e rapidamente fixado com glutaraldeído. Após desidratação, infiltração, inclusão, seccionamento, coloração e outras etapas, as secções bem feitas do microscópio eletrónico foram observadas ao microscópio eletrónico de transmissão. 1.8 Eletroforese em gel de agarose Após a preparação dos reagentes, o ADN foi extraído e sujeito a eletroforese. Eletroforese em gel de agarose a 1%, voltagem 60V, tempo de eletroforese 1,5h. 1.9 Processamento estatístico Todos os dados foram processados pelo SPSS10.0 e foi utilizada a análise de variância (ANOVA) com um desenho aleatório. 2, Resultados 2.1 Peso do tumor e taxa de inibição do tumor O peso do tumor e a taxa de inibição do tumor de cada grupo são apresentados na Tabela 1. Como se pode ver na tabela, o peso do tumor de cada grupo administrado foi significativamente reduzido em comparação com o do grupo de controlo em branco, entre os quais o efeito supressor do tumor do grupo 5-FU foi o mais óbvio, sendo o peso do tumor o mais leve (P<0,01); o grupo tetrandrina também teve um efeito supressor do tumor óbvio (P<0,05). Tabela 1 Peso médio do tumor e taxa de inibição do tumor de cada grupo Grupo experimental Peso do tumor (g) (х±s) Taxa de inibição do tumor (%) Grupo de controlo em branco 4,78±1,53 Grupo de caldo Sijunzi 4,03±1,23* 15,69 Grupo 5-FU 3,12±1,08** 34,1 *P<0,05 vs. grupo em branco, **P<0,01 vs. grupo em branco, 2,2 Observações de microscopia eletrónica de transmissão Os pesos dos tumores do grupo de caldo Sijunzi e do grupo 5-FU foram os mais óbvios (P<0,01). A maioria das secções do grupo e do grupo 5-FU apresentava alterações de células necróticas: coloração pálida da cromatina, inchaço dos organelos e alterações semelhantes a vacúolos. Ambos os grupos não apresentaram um grande número de células com alterações características de apoptose. 2.3 Eletroforese em gel de agarose As bandas tipo escada de ADN são as alterações características das células em apoptose e as bandas electroforéticas da eletroforese de ADN não foram observadas no grupo Sijunzi Tang e no grupo 5-FU com bandas tipo escada óbvias. 3.Discussão Os resultados experimentais mostraram que o peso do tumor do grupo Sijunzi Tang foi significativamente reduzido em comparação com o do grupo branco, indicando que a fórmula tem um efeito positivo na inibição do tamanho do tumor e é benéfica para a aplicação clínica no tratamento de tumores. A morfologia das células apoptóticas era um núcleo compacto e citoplasma comprimido na fase inicial, e depois o núcleo fragmentou-se e evoluiu para vesículas apoptóticas, mas outros organelos permaneceram intactos. A caraterística bioquímica mais marcante é a clivagem das ligações duplas de ADN entre os nucleossomas para formar fragmentos de 180-200 pb, que aparecem como "escadas" na eletroforese em gel de agarose de ADN [2]. Nas nossas experiências, através da observação ao microscópio eletrónico e da deteção da eletroforese em gel de agarose, o grupo de Sijunzi Tang não apresentou marcadores característicos de apoptose óbvios e a eletroforese em agarose não mostrou a típica "escada" de ADN, pelo que não vimos as alterações apoptóticas típicas. Este estudo mostrou que o Sijunzi Tang apresentou uma taxa de inibição tumoral óbvia nos ratinhos hormonais, e o seu mecanismo não estava relacionado com a indução da apoptose das células tumorais. Sijunzi Tang é principalmente tónico e pode não ter o efeito de atacar diretamente o mal. Nas experiências in vivo, o grupo de Sijunzi Tang teve um efeito supressor de tumores significativo, que pode atuar através de outras vias gerais. A literatura relata que os medicamentos tónicos têm efeitos positivos na função imunitária e no tempo de sobrevivência de animais hormonais em experiências in vivo [3]. Sijunzi Tang pode aumentar significativamente a atividade das células NK em ratos hormonais, e o mecanismo anti-tumoral da classe de medicamentos tónicos Sijunzi Tang pode ser principalmente melhorar a função imunitária do corpo, aumentar a atividade das células NK e das células LAK no corpo e exercer um efeito de morte indireto [3], que pode atingir o objetivo de dissipar o mal apoiando o positivo. Os resultados experimentais sugerem que Sijunzi Tang, que pertence ao benefício tónico, pode inibir significativamente o crescimento de tumores em ratos hormonais, o que prova que este tipo de medicina tradicional chinesa tem efeitos óbvios de supressão de tumores in vivo. O Sijunzi Tang não induziu a apoptose de células tumorais in vivo e o seu efeito sobre os tumores pode ser conseguido através de outras acções.