Recentemente, realizou-se em Chongqing a 20ª Reunião Académica do Ramo de Patologia da Associação Médica Chinesa e a 4ª Conferência Anual de Patologia da China. Durante o encontro, peritos incluindo o Professor Zhao Yun do Hospital Popular da Universidade de Pequim, o Professor Guo Huiqin do Hospital do Cancro da Academia Chinesa das Ciências Médicas e o Professor Mei Ping do Hospital Popular Provincial de Guangdong discutiram o último teste de dupla coloração CINtec PLUS (p16/Ki-67 teste de dupla coloração citológica) e a aplicação do teste de histologia p16 no rastreio do cancro do colo do útero para orientar eficazmente a prática clínica. A expressão concorrente p16/Ki-67 sugere a desregulação do ciclo celular A infecção persistente pelo papilomavírus humano (HPV) é uma das principais causas do cancro do colo do útero. Normalmente, se a infecção por HPV não for eliminada, torna-se permanente e irá produzir as proteínas oncogénicas virais E6 e E7, que se podem ligar à proteína supressor de tumores p53 e à proteína retinoblastoma pRb, respectivamente, inactivando ambos os oncogenes. A proteína HPV E6 tem uma grande afinidade pelo tipo selvagem p53 e a ligação ao p53 resulta numa rápida degradação do p53, impedindo assim a resposta celular aos danos do ADN e levando à acumulação de alterações de traços genéticos e consequente malignidade genotípica. A proteína HPV E7 interfere com o ciclo celular, causando diferenciação celular contínua e lesões pré-cancerosas, resultando em regulação celular descontrolada, imortalização e, se não tratada, progressão para o cancro. pRb, à qual a proteína E7 se liga preferencialmente, prejudica a função pRb, perturba a capacidade do factor de transcrição E2F de se ligar e inicia o processo de transformação oncogénica, levando ao crescimento desregulado de células epiteliais, resultando no desenvolvimento de uma série de proliferações celulares normais, incluindo as proteínas Ki-67 e p16. O gene p16 é uma proteína dependente da hormona do ciclo celular. O gene p16 é um representante típico dos inibidores da quinase dependente da ciclina celular (CDK) e tem sido associado a uma variedade de tumores. O produto genético inibe a actividade CDK4, daí o nome p16INK4. A sobreexpressão p16 sugere que as células normais estão numa fase de paragem do ciclo celular e que um curto período de infecção por HPV não afecta a regulação do ciclo celular, enquanto que a sobreexpressão persistente A proliferação anormal de células infectadas com HPV leva à sobreexpressão p16, e portanto a sobreexpressão p16 pode ser usada como um marcador para lesões cervicais. Ki-67 é um gene antigénio nuclear que marca a progressão do ciclo celular e a fase proliferativa das células, e a sua expressão é restrita às fases G1, S, G2 e M do ciclo de proliferação celular e está ausente na fase G0. Normalmente, em células fisiologicamente normais, a expressão p16 e Ki-67 são antagónicas uma à outra e não ocorrem em conjunto. Se as p16 e Ki-67 são sobreexpressas simultaneamente, isto indicaria inactivação da proteína pRb e desregulação do ciclo celular. Portanto, a detecção simultânea de p16 e Ki-67 na mesma célula pode ser utilizada como marcador da desregulação do ciclo celular, que está associada à transformação oncogénica induzida por vírus HPV de alto risco e pode ajudar a detectar células verdadeiramente doentes, independentemente dos achados morfológicos. Quando testado positivo para p16/Ki-67, sugere fortemente lesões de alto grau e fornece um teste objectivo para distinguir as mulheres com lesões potencialmente de alto grau. Em Julho de 2012, o College of American Pathologists (CAP) e as directrizes da American Society for Colposcopy and Cervical Pathology (ASCCP) declararam que a p16 pode ser utilizada como marcador reflector do HPV E6/E7 que afecta a proliferação celular e que existem provas suficientes para uma recomendação relacionada com lesões epiteliais escamosas anal-genitais de baixo grau, recomendando a utilização do anticorpo p16INK4a com um número de clone específico (E6H4) como um biomarcador para detectar se a infecção por HPV afecta a regulação do ciclo celular. Este número de clone é o único anticorpo p16INK4a aprovado pelo IVD no mundo. CINtec PLUS (p16/Ki-67 teste de citologia de dupla coloração) melhora a gestão da triagem do rastreio do cancro do colo do útero Actualmente, o rastreio do cancro do colo do útero na China enfrenta problemas como a baixa sensibilidade dos testes citológicos (50-70%), fraca reprodutibilidade entre observadores, controlo de qualidade inadequado e falta de pessoal técnico. A aplicação do biomarcador p16/Ki-67 pode melhorar eficazmente os testes de triagem citológicos. O teste CINtec PLUS altamente sensível e específico pode ser usado para: triagem de células epiteliais escamosas atípicas sem significado definido (ASC-US) (especialmente para mulheres jovens); triagem de lesões intra-epiteliais escamosas de baixo grau (LSIL); triagem de indivíduos citológicos-negativos mas de alto risco para o HPV-positivos quando combinados com a citologia e o rastreio do HPV; e o HPV como rastreio primário para A tecnologia CINtec PLUS pode reduzir eficazmente o sub-diagnóstico de lesões cervicais de alta qualidade, fornecendo tempo e provas suficientes para cuidados clínicos e de pacientes, e melhorando a detecção e intervenção precoce de doenças cervicais pré-existentes. Pode também reduzir e evitar colposcopia desnecessária. O Professor Mei Ping do Hospital Popular Provincial de Guangdong partilhou dados do estudo clínico do CINtec PLUS na conferência. Um estudo prospectivo multipaíses e multicêntricos, PALMS (Primary ASCUS LSIL Marker Study) rastreou mais de 27.000 mulheres com uma idade média de 39,9 anos. Todas as mulheres foram testadas para citologia tradicional (Papanicolau), p16/Ki-67 coloração dupla (CINtec PLUS) e HC2 HPV durante o ensaio, com a confirmação da biópsia de CIN2+ como o ponto final do ensaio. O estudo demonstrou que o teste CINtec PLUS foi 18% mais sensível para a CIN2+ do que a citologia convencional sem comprometer a especificidade (86,7% vs 68,5%). Para a triagem em mulheres HPV-positivas, o teste de dupla coloração CINtec PLUS foi 17% mais sensível para CIN3 em comparação com a citologia convencional (88% vs 71%). Dos 575 pacientes com citologia ASC-US, 18 pacientes tinham CIN2 ou superior confirmado por biopsia, e CINtec PLUS com dupla coloração tinha 94% de sensibilidade e 78% de especificidade e era superior ao teste do HC2 HPV. Entretanto, 63 dos 526 pacientes com LSIL tinham CIN2 ou superior confirmado por biopsia, e a especificidade do teste CINtec PLUS foi de 54%, muito superior à do teste HC2 HPV. Além disso, o estudo retrospectivo EEMAPS (European Equivocal or Mildly Abnormal Papanicolaou Cytology) realizou biópsias, p16/Ki-67 coloração dupla (CINtec Plus) e teste de HC2 HPV num total de 776 espécimes remanescentes de citologia em meio líquido ASC-US/LSIL (ThinPrep) de 5 laboratórios de citologia europeus no prazo de 6 meses após a amostragem da citologia. Dos 361 pacientes ASC-US, 77 foram confirmados como tendo CIN2 ou mais; dos 425 pacientes LSIL, 72 foram confirmados como tendo CIN3 ou mais. A sensibilidade do teste CINtec PLUS para CIN3+ foi de 96%, enquanto que a especificidade foi de 68%, 49% superior à do teste HC2 HPV, sugerindo que o teste de dupla coloração poderia ser um teste mais razoável meios de triagem LSIL. Quando se utiliza a citologia combinada e o rastreio HPV, o teste de dupla coloração CINtec PLUS pode ser aplicado à triagem daqueles que são citologia negativa mas HPV de alto risco positivo. Os resultados de um ensaio que registou 425 mulheres com mais de 30 anos de idade que apresentaram citologia negativa e testaram positivo para HPV de alto risco mostraram que o teste de dupla coloração CINtec PLUS tinha uma sensibilidade de 91,9% e especificidade de 82,1% para CIN2+ e 96,4% e especificidade de 76,9% para CIN3+. O Professor Guo Huaiqin do Hospital do Cancro da Academia das Ciências Médicas também partilhou a sua experiência com o CINtec PLUS, que pode efectivamente reduzir o fardo do médico examinador através da dupla coloração dos filmes. Além disso, nos casos em que o diagnóstico morfológico é difícil, por exemplo, se alguns aglomerados de células apinhadas são HSIL ou alterações reactivas, o teste de dupla coloração pode ser utilizado como auxiliar de diagnóstico. O teste citológico Roche Diagnostics CINtec PLUS permite a detecção combinada de p16 e Ki-67 com excelente especificidade e sensibilidade. O sinal p16 (castanho) e o sinal Ki-67 (vermelho) na mesma célula são julgados como positivos pela presença simultânea da coloração castanha do citoplasma e da coloração vermelha do núcleo. Espera-se que o teste esteja disponível na China até ao final de 2015. p16 histology test: melhorar a exactidão do diagnóstico patológico e orientar o diagnóstico clínico do cancro do colo do útero O Professor Zhao Yun do Hospital Popular da Universidade de Pequim discutiu o significado da utilização da p16 na prática clínica a partir da perspectiva de um clínico. Em particular, o Professor Zhao salientou os danos causados aos doentes pelo tratamento excessivo de lesões cervicais e a consequente necessidade clínica de resultados de diagnóstico patológico precisos para orientar o tratamento dos doentes. Normalmente, as lesões pré-cancerosas epiteliais cervicais escamosas, ou neoplasia intra-epitelial cervical (NIC), são classificadas como NIC1, NIC2 e NIC3 de acordo com o grau de lesão, e as estratégias de tratamento clínico variam consoante o grau de lesão. Uma classificação mais precisa do CIN é essencial para as decisões de tratamento clínico. Embora a interpretação de H&E (Hematoxilina-eosina), que mancha a histomorfologia é o padrão actual para a classificação CIN, é susceptível ao julgamento subjectivo do patologista e é particularmente pouco reprodutível no CIN2. medida que a investigação básica e clínica continua, a relação entre o HPV e o cancro do colo do útero está a tornar-se mais clara, e reconhece-se gradualmente que o HPV, quando presente no estado livre nas células cervicais, causa geralmente lesões cervicais de baixo grau (LSIL), que têm um risco muito baixo de progressão para o cancro do colo do útero e não são verdadeiras lesões pré-cancerosas; quando presentes na forma integrada nas células hospedeiras, causam lesões cervicais de alto grau (HSIL), que são verdadeiras lesões pré-cancerosas. Trata-se de uma verdadeira lesão pré-cancerosa com um elevado risco de progressão para o cancro do colo do útero. Com base nisso, a Academia Americana de Patologia (CAP) e a Sociedade Americana de Colposcopia e Patologia (ASCCP) publicaram conjuntamente um consenso (Projecto LAST) recomendando uma nomenclatura a dois níveis para lesões intra-epiteliais escamosas cervicais, divididas em lesões de grau inferior e lesões de grau superior. O primeiro inclui CIN1 na nomenclatura de três níveis e o segundo inclui CIN2 e CIN3. A quarta edição da classificação da OMS de tumores genitais femininos publicada em 2014 também recomenda esta nomenclatura. Na prática, porém, há menos consistência no diagnóstico de H&E para CIN2, e mesmo nos Estados Unidos, onde os patologistas são rigorosamente formados, há um desacordo considerável entre os médicos sobre o diagnóstico do mesmo caso. Na realidade, parte do CIN2 é uma lesão de grau verdadeiramente alto, e uma proporção significativa é uma lesão de grau baixo. Quando a identificação morfológica de lesões de grau elevado ou baixo é controversa, os biomarcadores são recomendados para ajudar no diagnóstico diferencial. O ÚLTIMO projecto demonstrou que a utilização da p16INK4a fornece provas de alta qualidade para uma melhor consistência de diagnóstico e recomenda a sua utilização em quatro situações: quando o diagnóstico diferencial de HSIL e lesões não-neoplásicas semelhantes é necessário, tais como hiperplasia epitelial escamosa, atrófica e reparadora imatura e artefactos devido à manipulação manual; CIN2 questionável; opiniões diagnósticas diferentes entre revisores; HPV testes, citologia, colposcopia sugerindo a possibilidade de lesões de alto grau, mas um diagnóstico histológico negativo. Com base nos dados do projecto LAST, em 2014 a OMS recomendou também a utilização da coloração imuno-histoquímica p16INK4a para diagnósticos duvidosos a fim de melhorar a exactidão do diagnóstico histológico das lesões cervicais e a consistência do diagnóstico entre patologistas. O CAP e o ASCCP recomendam a mesma gestão para o LSIL que para o CIN1 e para o HSIL, para a maioria das mulheres, como para o CIN2/3. p16INK4a-os casos positivos são geridos como lesões de alto grau (HSIL) e recomenda-se o tratamento. De acordo com o estudo SEER, a incidência de cancro do colo do útero em mulheres com menos de 25 anos de idade é de apenas 1,5/100.000, portanto, em mulheres jovens com HSIL (CIN2) ou HSIL sem CIN2 ou 3 definitivo, a citologia e colposcopia podem ser realizadas a cada 6 meses e o tratamento dado se a lesão persistir durante 24 meses, se a colposcopia for insatisfatória, se a lesão aumentar de tamanho ou se a colposcopia for pior do que antes. previamente, depois é dado tratamento. O biomarcador p16INK4a permite uma compreensão mais microscópica dos mecanismos patológicos das lesões pré-cervicais, melhora a precisão da interpretação do LSIL/HSIL e assegura uma gestão clínica mais racional dos pacientes em triagem. O teste Roche Diagnostics CINtec histologia p16 (contendo anticorpo anti-p16INK4a (E6H4)) foi lançado na China em Maio de 2014.