A FIV de segunda geração, ou FIV de segunda geração, selecciona normalmente espermatozóides de qualidade relativamente elevada da multidão de espermatozóides sob o microscópio através de métodos como a centrifugação em gradiente e completa a fertilização através de uma única injeção de espermatozóides, mas não é possível selecionar os melhores espermatozóides. A segunda geração de FIV pode reduzir eficazmente as deficiências no processo de fertilização dos espermatozóides, eliminar a maior parte dos espermatozóides relativamente pobres e selecionar os espermatozóides de alta qualidade com boa motilidade e boa morfologia, aumentando assim a taxa de sucesso da fertilização. Além disso, embora a FIV II possa selecionar espermatozóides de qualidade relativamente elevada para a fertilização, é difícil completar o rastreio se a qualidade do esperma do próprio doente for demasiado fraca. Os doentes que necessitem de FIV e cuja qualidade do esperma seja demasiado fraca podem seguir as instruções do médico para melhorar a qualidade do esperma, prestando atenção ao repouso, abstendo-se de fumar e beber e praticando exercício físico adequado antes de se submeterem à FIV de segunda geração. No caso de doentes com azoospermia obstrutiva, pode recorrer-se à punção testicular ou epididimária para obter espermatozóides e efetuar a fertilização.