Desde 1985, quando o primeiro teste de anticorpos anti-HIV foi aprovado nos EUA, a tecnologia de teste de anticorpos anti-HIV foi actualizada com o rápido desenvolvimento da imunologia e das técnicas de biologia molecular. De acordo com a “National HIV Testing Technical Specification” emitida pelo Ministério da Saúde em 2004, o teste de anticorpos anti-HIV divide-se em três etapas: rastreio inicial, teste de novo teste e teste de confirmação.
1.Primary rastreio e teste de novo teste.
Inclui principalmente o ensaio de imunoensaio enzimático, teste de detecção rápida, imunoensaio de quimioluminescência, técnica de imunoensaio de fluorescência resolvida no tempo e teste de anticorpos anti-HIV não invasivo.
1.1 Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).
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Reagentes ELISA de anticorpos anti-HIV passaram por quatro gerações.
Em 1985, a primeira geração de ELISA indirecto, o lisado do vírus HIV como antigénio do envelope, sensibilidade e especificidade não é elevada, o período de janela de cerca de 3 meses; 1990, a segunda geração de ELISA indirecto, geneticamente modificado recombinante ou peptídeo sintético como antigénio do envelope, pode detectar o HIV-1 e HIV-2 ao mesmo tempo, a especificidade melhorou muito em comparação com a primeira geração, o período de janela foi encurtado em cerca de 20 dias; 1994, a terceira geração do método de sanduíche com duplo antigénio A terceira geração do método de sanduíche com duplo antigénio, o mesmo que a segunda geração, mas o novo peptídeo gp41, pode detectar uma variedade de subclasses de anticorpos HIV, incluindo IgG, IgM, IgA, etc. , a sensibilidade e especificidade é mais elevada, o período de janela é encurtado para 3-4 semanas, são os produtos correntes; 1998, a 4ª geração, portador de fase sólida revestido de antigénio HIV e anti-p24, pode detectar o anticorpo HIV e o antigénio p24 ao mesmo tempo, a sensibilidade é ainda melhorada, “o período de janela é encurtado para cerca de 20 dias. A sensibilidade é ainda melhorada e o “período de janela” é ainda encurtado em 4-8d, mas existe um “segundo período de janela”, que é actualmente utilizado para diagnóstico auxiliar.
1.2 Teste rápido (RT).
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>Incluindo teste imunospot, teste imunocromatográfico, teste de aglutinação de partículas de gelatina. O método é simples: não é necessário equipamento especial, rápido: os resultados do teste podem ser obtidos dentro de 30 min, especialmente para testes de emergência, locais de sentinela de vigilância do HIV, centros de saúde municipais e estações de saúde comunitárias, etc.
1.3 Imunoensaio de quimioluminescência.
Micropartícula, tecnologia de imunoensaio de quimioluminescência em microplacas para detectar anticorpos do HIV, com maior sensibilidade do que o ELISA. O imunoensaio de quimioluminescência electroquímica construído por materiais mesoporos carregados com pontos quânticos e encapsulados com nanogold pode detectar anticorpos HIV com alta selectividade e sensibilidade.
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1.4 Técnica de imunoensaio de fluorescência com resolução temporal.
A aplicação de sanduíche de antígeno duplo combinado com análise de imunofluorescência com resolução temporal (antígeno HIV marcado com europium) melhorou muito a sensibilidade e especificidade. A sensibilidade do kit é 100%, a especificidade é 98,9%, e a exactidão é 99,4%.
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1,5 Teste de anticorpos não invasivo do VIH.
>>br />Além do teste de sangue, o teste de saliva e urina tornou-se um novo meio de teste do VIH, que tem mais vantagens em termos de segurança e conveniência.
2. Teste de confirmação.
Amostras positivas de anticorpos anti-HIV precisam de confirmar o teste, principalmente teste imunoblot, teste imunoblot, também inclui teste de radioimunoprecipitação e teste de imunofluorescência, etc.
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2.1 Teste imunoblot (WB).
WB é actualmente o método mais comummente utilizado para a confirmação do HIV positivo na China, e a combinação de ELISA + WB é o padrão de ouro reconhecido para o diagnóstico do HIV. O princípio básico é a electroforese do antigénio do vírus HIV inteiro por SDS-PAGE e depois a electrotransferência para a membrana NC; adicionar o soro a ser testado, depois adicionar a IgG anti-humana marcada com enzima e substrato para apresentar uma banda na posição correspondente da membrana que possa ser discernida a olho nu.
2.2 O ensaio de immunoblotting de tira (LIA).
LIA é uma modificação do método WB, utilizando proteína recombinante geneticamente modificada ou peptídio quimicamente sintetizado para substituir o antigénio do lisado viral utilizado no método WB como antigénio de reagente de diagnóstico.