O imunoensaio enzimático, ou ELISA para abreviar, centra-se em permitir que os anticorpos se liguem aos complexos enzimáticos, que são depois detectados pelo desenvolvimento da cor. Passos: O ELISA é detectado com soro, primeiro o sangue deve ser aglutinado durante pelo menos meia hora, depois o soro será tomado para diluir o complexo enzimático com diluente, adicionar soro e controlo negativo e positivo, e também o controlo de qualidade. Após uma hora de incubação, a placa é lavada, o substrato é adicionado, e a reacção é completada pela adição da solução de terminação após meia hora de reacção à prova de luz, e depois é lida. O valor é utilizado para determinar se o resultado é negativo ou positivo.
Classificação
Teste serológico > Teste serológico para vírus
Princípio de medição
ELISA: Um portador encapsulado com o antigénio do vírus da rubéola inactivado pode ligar-se a anticorpos específicos na amostra em teste, e o anticorpo correspondente é detectado com imunoglobulina anti-humana marcada com enzima e substrato.
Reagentes
O mesmo que o ELISA geral, excepto para a placa de microtitulação inactivada do vírus da rubéola revestida com antigénio e os soros de referência negativos e positivos.
Método de operação
1. Recolha de amostras, apenas uma amostra de sangue deve ser colhida para o teste de rastreio, mas se for necessário determinar o estado imunitário da pessoa infectada, as amostras devem ser colhidas de doentes suspeitos de rubéola no prazo de 3 dias após o aparecimento da erupção cutânea e nos 14 a 21 dias seguintes para testes simultâneos.
2, como no ELISA geral, adicionar 50 μl de PBS a cada poço do controlo e amostra, seguido de 10 μl de amostra, manter a 25°C durante 45 min, lavar e aspirar.
3.Add 250μl de marcador enzimático a cada poço, manter quente e lavar da mesma forma.
4.Add 250μl de solução de substrato pNPP, manter e lavar da mesma forma, depois adicionar 50μl de 1mol/L hidróxido de sódio para abortar a reacção, medir o valor de absorvância de cada poço a 405nm, e julgar o resultado da amostra a ser testada.
5.If o resultado é positivo, a amostra pode ser ainda mais diluída para determinação do título de anticorpos, comparar os resultados das duas amostras sucessivas, e fazer um julgamento
Determinação
1, os anticorpos IgG e lgM do vírus da rubéola são positivos, ou o título de anticorpos IgG ≥ 1: 512, indicando uma infecção recente com o vírus da rubéola.
2, tanto os anticorpos IgG como IgM para o vírus da rubéola são negativos, indicando uma infecção anterior com o vírus da rubéola.
3, os títulos de anticorpos IgG do vírus da rubéola <1_512 e anticorpos IgM são negativos, indicando um historial de infecção anterior.
4, Além disso, a reinfecção com o vírus da rubéola não é facilmente detectada, porque apenas os anticorpos IgM transitórios aparecem ou aparecem a níveis muito baixos. Portanto, um título de anticorpos IgG do vírus da rubéola que é mais de 4 vezes elevado num soro duplo é um indicador de infecção recente pelo vírus da rubéola, independentemente de o anticorpo IgM ser positivo.
Significado clínico
A rubéola, também conhecida como sarampo alemão, tem um pico de incidência na Primavera até ao início do Verão. A taxa de anticorpos positivos do vírus da rubéola aumenta com a idade, e os recém-nascidos podem adquirir anticorpos IgG para o vírus da rubéola através das suas mães que foram infectadas com o vírus no início da vida. Os anticorpos IgG são produzidos cerca de 4 dias após o início da erupção cutânea, atingindo um pico de cerca de 10 dias e durando 6-12 semanas ou ocasionalmente até um ano; os anticorpos IgG aparecem ligeiramente mais tarde do que os anticorpos IgM e aumentam gradualmente, atingindo um pico de 1 a 2 meses. Os anticorpos IgG aparecem um pouco mais tarde do que os anticorpos IgM e aumentam gradualmente, atingindo um pico de 1 – 2 meses e depois diminuem, na sua maioria para toda a vida. 80% da população é positiva para este anticorpo.
Medição
Gama normal: IgM anticorpo anti-rubéola negativo, IgG anticorpo anti-rubéola negativo.
Descrição do teste: O anticorpo anti-rubéola IgM é usado principalmente para diagnosticar infecção aguda com o vírus da rubéola, e o anticorpo anti-rubéola Ig aparece geralmente no soro 2 semanas após a infecção.
Significado clínico: Positivo: Infecção pelo vírus da rubéola.